| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第11-16页 |
| 材料与方法 | 第16页 |
| 1. 实验材料 | 第16-21页 |
| 1.1. 原代细胞和细胞株 | 第16页 |
| 1.2. 实验动物 | 第16页 |
| 1.3. 实验仪器设备 | 第16-17页 |
| 1.4. 主要试剂及配方 | 第17-21页 |
| 1.4.1. 抗体 | 第17-18页 |
| 1.4.2. 常用试剂 | 第18-19页 |
| 1.4.3. 主要试剂配制 | 第19-21页 |
| 2. 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.1. 小鼠DNA提取及基因型鉴定 | 第21-23页 |
| 2.2. 原代脑血管内皮细胞提取 | 第23-24页 |
| 2.3. 细胞培养 | 第24页 |
| 2.3.1. BMEC细胞培养 | 第24页 |
| 2.3.2. 原代脑血管内皮细胞培养 | 第24页 |
| 2.4. 细胞的缺氧处理 | 第24页 |
| 2.5. 细胞计数 | 第24-25页 |
| 2.6. 检测跨内皮细胞电阻(TEER) | 第25页 |
| 2.7. 检测荧光素钠(Na F)通透性 | 第25-26页 |
| 2.8. 细胞免疫荧光 | 第26页 |
| 2.9. Western Blot检测蛋白表达 | 第26-28页 |
| 2.9.1. 细胞总蛋白的提取 | 第26页 |
| 2.9.2. 脑组织总蛋白的提取 | 第26页 |
| 2.9.3. SDS-PAGE电泳 | 第26-28页 |
| 2.10. 实时定量PCR检测m RNA表达 | 第28-30页 |
| 2.10.1. RNA的提取 | 第28页 |
| 2.10.2. RNA质量的检测 | 第28页 |
| 2.10.3. RNA反转录成c DNA | 第28-29页 |
| 2.10.4. 实时定量PCR | 第29-30页 |
| 2.11. 数据处理及统计学分析 | 第30-31页 |
| 实验结果 | 第31-51页 |
| 一、神经粘附分子NB3在神经-血管单元中的表达 | 第31-32页 |
| 二、小鼠脑血管内皮细胞的培养与鉴定 | 第32-35页 |
| 2.1. 原代小鼠脑血管内皮细胞的培养 | 第32-33页 |
| 2.2. 原代小鼠脑血管内皮细胞的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3. 永生化的小鼠脑血管内皮细胞BMEC的鉴定 | 第34-35页 |
| 三、缺氧对脑血管内皮细胞通透性和紧密连接的影响 | 第35-40页 |
| 3.1. 缺氧增加脑血管内皮细胞的通透性 | 第36-37页 |
| 3.2. 缺氧降低脑血管内皮细胞紧密连接相关蛋白及NB3的表达 | 第37-40页 |
| 四、补充NB3蛋白对缺氧下脑血管内皮细胞紧密连接和通透性的影响 | 第40-44页 |
| 4.1. 可溶性NB3蛋白保护缺氧后脑血管内皮细胞的通透性 | 第40-41页 |
| 4.2. 可溶性NB3蛋白促进降低缺氧后脑血管内皮细胞紧密连接的表达 | 第41-42页 |
| 4.3. NB3的亲同性作用对缺氧损伤脑血管内皮细胞通透性的影响 | 第42-44页 |
| 五、NB3缺失对缺氧下脑血管内皮细胞紧密连接和通透性的影响 | 第44-51页 |
| 5.1. NB3基因敲除小鼠鉴定 | 第44-45页 |
| 5.2. NB3缺失加重缺氧导致的脑血管内皮细胞通透性增加 | 第45-46页 |
| 5.3. NB3缺失加重缺氧对脑血管内皮细胞紧密连接蛋白的破坏 | 第46-51页 |
| 5.3.1 NB3缺失加重缺氧导致的脑血管内皮细胞紧密连接蛋白表达下降 | 第46-48页 |
| 5.3.2 B3缺失加重缺氧导致的脑血管内皮细胞紧密连接形态学变化 | 第48-51页 |
| 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 文献综述 | 第61-74页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 缩略词表 | 第74-76页 |
| 攻读学位期间文章情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 个人简历 | 第78页 |
