| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 里氏木霉及其研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 T. reesei纤维素酶系的组成 | 第11-12页 |
| 1.3 T. reesei表达系统的研究 | 第12-13页 |
| 1.4 T. reesei纤维素酶基因的转录调控 | 第13-14页 |
| 1.5 RNA干扰在T. reesei中的应用 | 第14-15页 |
| 1.6 micro RNA的研究 | 第15-17页 |
| 1.7 本研究的主要内容及目的意义 | 第17-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-35页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 培养基及溶液的配制 | 第18-19页 |
| 2.1.2.1 培养基的配制 | 第18-19页 |
| 2.1.2.2 溶液的配制 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-35页 |
| 2.2.1 T. reesei milRNA抑制载体的构建 | 第20-24页 |
| 2.2.1.1 质粒p-Ppdc’-Tchb1的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.1.2 Tough Decoy序列的合成 | 第21页 |
| 2.2.1.3 酶切产物的回收 | 第21-22页 |
| 2.2.1.4 感受态细胞制备 | 第22-23页 |
| 2.2.1.5 目的片段与载体的连接、转化 | 第23-24页 |
| 2.2.2 T. reesei milRNA过表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.2.1 T. reesei QM9414基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.2.2 扩增T. reesei milRNA片段 | 第24-25页 |
| 2.2.3 T. reesei原生质体的制备及转化 | 第25-26页 |
| 2.2.4 鉴定抑制载体和过表达载体转化子 | 第26页 |
| 2.2.5 T. reesei的RNA提取（Trizol法） | 第26-27页 |
| 2.2.6 T. reesei的RNA的反转录 | 第27-28页 |
| 2.2.6.1 T. reesei的milRNA的反转录 | 第27-28页 |
| 2.2.6.2 T. reesei总RNA的gDNA去除及反转录 | 第28页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR检测相对表达量 | 第28-31页 |
| 2.2.7.1 Taq Man探针法检测milRNA表达量 | 第28-29页 |
| 2.2.7.2 SYBR GreenⅠ法检测cbh1、egl1表达量 | 第29-31页 |
| 2.2.8 酶活测定（滤纸酶活和CMC酶活） | 第31-33页 |
| 2.2.8.1 滤纸酶活的测定 | 第32页 |
| 2.2.8.2 CMC酶活的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.9 碳氮源对菌株产酶能力的影响 | 第33页 |
| 2.2.10 测定优化培养后菌株的滤纸酶活 | 第33页 |
| 2.2.11 菌株cbh1、egl1、xyr1、cre1的相对表达量测定 | 第33-35页 |
| 第3章 结果与分析 | 第35-54页 |
| 3.1 抑制载体的构建和鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2 抑制重组菌的鉴定 | 第36-38页 |
| 3.3 过表达载体的构建和鉴定 | 第38-41页 |
| 3.4 过表达重组菌的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.5 重组菌转录水平的基因相对表达量分析 | 第42-46页 |
| 3.5.1 重组菌总RNA的提取及定量 | 第42-43页 |
| 3.5.2 重组菌milRNA相对表达量分析 | 第43-45页 |
| 3.5.3 重组菌cbh1、egl1相对表达量分析 | 第45-46页 |
| 3.6 重组菌的酶活测定（滤纸酶活和CMC酶活） | 第46-49页 |
| 3.6.1 重组菌的滤纸酶活测定结果 | 第46-48页 |
| 3.6.2 重组菌的CMC酶活测定结果 | 第48-49页 |
| 3.7 碳氮源对菌株产酶的影响 | 第49-51页 |
| 3.8 菌株cbh1、egl1、xyr1、cre1的相对表达量测定 | 第51-52页 |
| 3.9 菌株优化培养后的滤纸酶活测定结果 | 第52-54页 |
| 第4章 讨论 | 第54-56页 |
| 第5章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第71页 |
