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功血雌激素诱导VEGF-MMPs途径及其血清标志物研究

摘要第4-9页
Abstract第9-15页
第1章 绪论第24-26页
    1.1 立题依据第24-26页
        1.1.1 国内外研究现状第24页
        1.1.2 科学问题第24-26页
第2章 VEGF在雌激素诱导MMP-2/9表达中作用第26-38页
    2.1 前言第26-27页
    2.2 试剂材料第27页
    2.3 实验方法第27-30页
        2.3.1 原代子宫内膜上皮细胞培养第27页
        2.3.2 原位zymography第27-28页
        2.3.3 mRNA和蛋白质合成阻断试验第28页
        2.3.4 VEGF RNA干扰试验第28页
        2.3.5 U0126阻断Erk磷酸化第28页
        2.3.6 明胶zymography第28-29页
        2.3.7 Western blotting第29页
        2.3.8 细胞总RNA抽提及实时RT第29-30页
        2.3.9 数据处理和统计分析第30页
    2.4 结果第30-34页
        2.4.1 ADUB子宫内膜组织MMP-2/9活性增加第30页
        2.4.2 雌激素诱导原代子宫内膜上皮细胞MMP第30-31页
        2.4.3 mRNA和蛋白质合成抑制剂阻断雌激素诱导的MMP-2/9 表达第31-32页
        2.4.4 雌激素激活子宫内膜上皮细胞ErK1/2 信号通路诱导VEGF表达第32-33页
        2.4.5 ErK信号通路的激活参与雌激素诱导的MMP-2/9表达第33-34页
    2.5 VEGF通过激活Erk1/2信号通路导致MMP-2/9表达增高第34-35页
    2.6 讨论第35-37页
    2.7 小结第37-38页
第3章 雌激素对大鼠子宫内膜血管内皮细胞通透性影响及分子机制第38-68页
    3.1 前言第38页
    3.2 主要试剂第38-39页
    3.3 主要仪器第39页
    3.4 实验方法第39-44页
        3.4.1 大鼠子宫内膜血管内皮细胞原代分离培养第39-40页
        3.4.2 MMP-2/9活性测定第40页
        3.4.3 Real-time RT-PCR第40-41页
        3.4.4 Western-blotting检测第41页
        3.4.5 MTT法测FITC-BSA对EC活力的影响第41页
        3.4.6 单层内皮细胞通透性测定第41-42页
        3.4.7 免疫荧光组织化学第42页
        3.4.8 大鼠子宫内膜组织MMP-2/9活性测定第42-43页
        3.4.9 Western blotting第43页
        3.4.10 子宫内膜组织血管通透性分析第43-44页
            3.4.10.1 冰冻切片第43-44页
            3.4.10.2 PI染色第44页
        3.4.11 统计学处理第44页
    3.5 结果第44-64页
        3.5.1 大鼠子宫内膜血管内皮细胞融合单层的鉴定第44-45页
        3.5.2 雌激素对子宫内膜血管内皮细胞通透性的影响第45-47页
        3.5.3 雌激素对子宫内膜血管内皮细胞MMP2/9 活性的影响第47-48页
        3.5.4 雌激素对子宫内膜血管内皮细胞MMP2/9 表达的影响第48-51页
        3.5.5 雌激素对子宫内膜血管内皮细胞Occludin、Claudin-5、ZO-1 蛋白表达的影响第51-53页
        3.5.6 雌激素对子宫内膜血管内皮细胞VEGF表达的影响第53-54页
        3.5.7 免疫荧光组织化学第54-55页
        3.5.8 雌激素对子宫内膜血管通透性的影响第55-56页
        3.5.9 雌激素对子宫内膜组织MMP2/9 活性的影响第56-58页
        3.5.10 雌激素对子宫内膜组织MMP2/9 表达的影响第58-60页
        3.5.11 雌激素对子宫内膜组织Occludin、Claudin- 5、ZO- 1 蛋白表达的影响第60-63页
        3.5.12 雌激素对子宫内膜组织VEGF表达的影响第63-64页
    3.6 讨论第64-66页
    3.7 小结第66-68页
第4章 ADUB血清标志物的筛选鉴定及其在月经血中的表达第68-76页
    4.1 前言第68页
    4.2 研究对象第68页
    4.3 实验方法第68-71页
        4.3.1 主要试剂和仪器第68-69页
        4.3.2 标本采集和处理第69页
        4.3.3 CM10蛋白芯片检测第69页
        4.3.4 Tricine-SDS-PAGE胶分离和质谱鉴定第69页
        4.3.5 免疫印迹第69-70页
        4.3.6 免疫沉淀第70页
        4.3.7 ELISA检测第70页
        4.3.8 RT-PCR第70页
        4.3.9 Western-blotting检测第70-71页
        4.3.10 蛋白质谱图分析第71页
        4.3.11 统计学处理第71页
    4.4 结果第71-74页
        4.4.1 ADUB标志物的筛选结果第71-72页
        4.4.2 SAA和VEGF在ADUB患者和对照者血清中的表达第72-73页
            4.4.2.1 Tricine-SDS-PAGE胶分离和质谱鉴定结果第72页
            4.4.2.2 免疫共沉淀鉴定结果第72-73页
        4.4.3 SAA和VEGF在ADUB患者和对照者月经中的表达第73页
            4.4.3.1 ELISA检测结果第73页
            4.4.3.2 RT-PCR检测结果第73页
        4.4.4 Western印迹检测结果第73-74页
    4.5 讨论第74-75页
    4.6 小结第75-76页
第5章 ADUB和ODUB血清蛋白标志物的比较研究第76-83页
    5.1 前言第76页
    5.2 研究对象第76页
    5.3 实验方法第76-77页
        5.3.1 标本采集和处理第76页
        5.3.2 蛋白芯片检测及蛋白质谱图分析第76-77页
        5.3.3 Tricine-SDS-PAGE胶分离和质谱鉴定第77页
        5.3.4 ELISA检测第77页
        5.3.5 RT-PCR第77页
        5.3.6 Western-blotting检测第77页
        5.3.7 主要试剂和仪器第77页
        5.3.8 统计学分析第77页
    5.4 结果第77-80页
        5.4.1 功血血清标志物的筛选结果第77-78页
        5.4.2 蛋白质鉴定结果第78页
        5.4.3 SAA、VKOR和VEGF在功血患者和正常妇女月经中的表达第78-80页
            5.4.3.1 ELISA检测结果第78-79页
            5.4.3.2 RT-PCR检测结果第79页
            5.4.3.3 Western-blotting检测结果第79-80页
    5.5 讨论第80-81页
    5.6 小结第81-83页
第6章 SAA对子宫内膜基质细胞VEGF表达的影响第83-93页
    6.1 前言第83页
    6.2 仪器材料第83-84页
    6.3 实验方法第84-87页
        6.3.1 ESC分离与培养第84-85页
        6.3.2 MTT法测SAA对ESC存活的影响第85页
        6.3.3 qRT-PCR第85页
        6.3.4 Westen Blot分析第85-86页
        6.3.5 酶联免疫吸附测定第86页
        6.3.6 细胞免疫组织化学第86-87页
        6.3.7 统计分析第87页
    6.4 结果第87-90页
        6.4.1 SAA对ESC存活的影响第87-88页
        6.4.2 SAA对ESC的VEGF表达的剂量效用第88-89页
        6.4.3 20mg/LSAA对ESC的VEGF表达的时间效用第89-90页
        6.4.4 SAA对ESC的VEGF分泌水平的影响第90页
    6.5 讨论第90-92页
    6.6 小结第92-93页
第7章 结论第93-94页
参考文献第94-108页
综述一第108-120页
    参考文献第115-120页
综述二第120-134页
    参考文献第127-134页
作者攻读学位期间所获科研成果第134-135页
致谢第135页

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