| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 符号及缩略语表 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-44页 |
| 第一节 植物盐胁迫机制和信号转导 | 第16-24页 |
| 1 土壤盐渍化 | 第16-17页 |
| 2 盐害对植物的影响 | 第17-18页 |
| 3 植物的耐盐性 | 第18-20页 |
| 4 盐胁迫下的信号转导途径 | 第20-24页 |
| 4.1 SOS信号转导途径 | 第20-21页 |
| 4.2 CDPK途径 | 第21-22页 |
| 4.3 ABA信号通路 | 第22页 |
| 4.4 磷脂信号通路 | 第22页 |
| 4.5 MAPK级联途径 | 第22-24页 |
| 第二节 信号转导中的磷脂酶 | 第24-42页 |
| 1 磷脂酶A | 第25-28页 |
| 1.1 植物PLA2 | 第25-26页 |
| 1.2 植物PLA1 | 第26-27页 |
| 1.3 植物pPLA | 第27-28页 |
| 2 磷脂酶C | 第28-36页 |
| 2.1 植物PI-PLC结构与功能 | 第28-30页 |
| 2.2 PI-PLC介导的逆境信号转导作用 | 第30-32页 |
| 2.3 PI-PLC相关磷酸肌醇信号途径 | 第32-35页 |
| 2.4 植物NPC的结构和功能 | 第35页 |
| 2.5 NPC介导的信号转导过程 | 第35-36页 |
| 3 磷脂酶D | 第36-42页 |
| 3.1 PLD的结构和功能 | 第36-38页 |
| 3.2 PLD参与的逆境信号转导研究进展 | 第38-39页 |
| 3.3 PLD调控作用机制 | 第39-42页 |
| 3.3.1 通过下游产物PA调控 | 第40页 |
| 3.3.2 PLD直接与蛋白互作 | 第40-42页 |
| 第三节 研究目的及意义 | 第42-44页 |
| 第二章 OsPLC1在水稻盐胁迫中功能鉴定和分析 | 第44-72页 |
| 引言 | 第44-45页 |
| 1 实验材料 | 第45-46页 |
| 1.1 植物材料 | 第45页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第45页 |
| 1.3 试剂盒、酶和抗体 | 第45-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-60页 |
| 2.1 水稻生长及处理方法 | 第46-47页 |
| 2.2 水稻叶片基因组DNA的提取和PCR验证 | 第47-48页 |
| 2.2.1 TPS法提取水稻基因组DNA | 第47页 |
| 2.2.2 PCR反应 | 第47-48页 |
| 2.3 水稻RNA水平的定量鉴定 | 第48-49页 |
| 2.3.1 RNA提取方法 | 第48页 |
| 2.3.2 RNA反转录成cDNA | 第48-49页 |
| 2.3.3 定量PCR | 第49页 |
| 2.4 植物蛋白质提取、分离和鉴定 | 第49-51页 |
| 2.4.1 水稻植株总蛋白提取 | 第49页 |
| 2.4.2 总蛋白的分离 | 第49-50页 |
| 2.4.3 蛋白质含量的测定 | 第50页 |
| 2.4.4 SDS聚丙烯酰胺-凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第50-51页 |
| 2.4.5 转膜 | 第51页 |
| 2.4.6 Western blot | 第51页 |
| 2.5 载体构建 | 第51-53页 |
| 2.5.1 片段克隆 | 第51-52页 |
| 2.5.2 PCR产物胶回收 | 第52页 |
| 2.5.3 酶切 | 第52页 |
| 2.5.4 连接 | 第52-53页 |
| 2.5.5 转化大肠杆菌 | 第53页 |
| 2.5.6 小提质粒 | 第53页 |
| 2.6 Southern bolt杂交检测 | 第53-54页 |
| 2.7 农杆菌介导的水稻转基因 | 第54-56页 |
| 2.7.1 转化农杆菌 | 第54页 |
| 2.7.2 愈伤诱导及农杆菌侵染法 | 第54-56页 |
| 2.7.3 潮霉素快速鉴定转基因幼苗方法 | 第56页 |
| 2.8 GUS染色 | 第56-57页 |
| 2.9 水稻逆境生理实验 | 第57页 |
| 2.9.1 含水量和存活率测定 | 第57页 |
| 2.9.2 Na~+和K~+离子含量测定 | 第57页 |
| 2.10 大提质粒和纯化 | 第57-58页 |
| 2.11 水稻原生质体提取、转化及荧光观察 | 第58-60页 |
| 2.12 本章所需引物列表 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-69页 |
| 3.1 OsPLC1缺失突变体的鉴定 | 第60-62页 |
| 3.2 转基因材料的构建、耐盐表型鉴定 | 第62-64页 |
| 3.3 钠钾离子含量分析 | 第64-66页 |
| 3.4 OsPLC1组织定位分析 | 第66-67页 |
| 3.5 OsPLC1亚细胞水平定位 | 第67-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 第三章 OsPLC1参与盐胁迫的机理研究 | 第72-106页 |
| 第一节 OsPLC1水解活性研究 | 第72-91页 |
| 引言 | 第72-73页 |
| 1 实验材料 | 第73-74页 |
| 1.1 植物材料 | 第73页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第73页 |
| 1.3 试剂 | 第73-74页 |
| 2 实验方法 | 第74-79页 |
| 2.1 定点突变 | 第74-75页 |
| 2.2 原核表达与纯化 | 第75页 |
| 2.3 OsPLC1活性的测定 | 第75-76页 |
| 2.4 脂结合实验 | 第76页 |
| 2.5 磷脂PIPs的提取和分离 | 第76-77页 |
| 2.6 免疫荧光组织化学分析 | 第77页 |
| 2.7 农杆菌瞬时侵染烟草叶片表皮 | 第77-78页 |
| 2.8 基因枪法转化水稻叶片细胞 | 第78-79页 |
| 2.8.1 金粉的准备和DNA的包裹 | 第78-79页 |
| 2.9 原生质体的盐处理 | 第79页 |
| 3 结果与分析 | 第79-89页 |
| 3.1 OsPLC1水解活性分析 | 第79-81页 |
| 3.2 OsPLC1能够水解质膜上的PtdIns4P | 第81-86页 |
| 3.3 野生型和突变体中PIPs含量的检测 | 第86-88页 |
| 3.4 外源添加磷脂对盐处理下原生质体存活率的影响 | 第88-89页 |
| 4 讨论 | 第89-91页 |
| 第二节 OsPLC1对下游的调控机理研究 | 第91-106页 |
| 引言 | 第91-92页 |
| 1 实验材料 | 第92页 |
| 1.1 植物材料 | 第92页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第92页 |
| 1.3 试剂盒 | 第92页 |
| 2 实验方法 | 第92-95页 |
| 2.1 水稻磷脂的提取及含量测定 | 第92-93页 |
| 2.2 InsP3的提取和测定 | 第93-94页 |
| 2.2.1 TCA提取法 | 第93页 |
| 2.2.2 反应物组分的准备 | 第93页 |
| 2.2.3 标样的配制 | 第93页 |
| 2.2.4 样品分析方法 | 第93-94页 |
| 2.3 基于FRET技术的Ca~(2+)检测 | 第94页 |
| 2.4 原生质体盐处理下钙离子变化的检测 | 第94-95页 |
| 3 结果与分析 | 第95-102页 |
| 3.1 OsPLC1的缺失对下游产物DAG和PA的影响 | 第95-96页 |
| 3.2 OsPLC1的缺失对下游InsP_3的影响 | 第96-97页 |
| 3.3 OsPLC1的缺失对胞质Ca~(2+)的影响 | 第97-101页 |
| 3.4 外源添加PIPs对盐胁迫下原生质体Ca~(2+)响应的影响 | 第101-102页 |
| 4 讨论 | 第102-106页 |
| 全文讨论 | 第106-110页 |
| 全文结论和创新之处 | 第110-112页 |
| 全文结论 | 第110页 |
| 创新之处 | 第110页 |
| 不足之处 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-130页 |
| 攻读博士学位期间发表及完成的科研论文 | 第130-132页 |
| 附录 | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134页 |
