| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 植物MYB转录因子的亚细胞定位 | 第12-13页 |
| 1.2 植物基因启动子的研究 | 第13-15页 |
| 1.2.1 植物启动子的概念及基本结构 | 第13-14页 |
| 1.2.2 植物启动子的分类及其应用进展 | 第14-15页 |
| 1.2.2.1 组成型启动子 | 第14页 |
| 1.2.2.2 诱导型启动子 | 第14-15页 |
| 1.2.2.3 组织特异型启动子 | 第15页 |
| 1.3 植物MYB转录因子的研究 | 第15-18页 |
| 1.3.1 植物MYB转录因子在种子萌发中的作用 | 第16页 |
| 1.3.2 植物MYB转录因子在逆境胁迫中的功能 | 第16-17页 |
| 1.3.3 植物MYB转录因子在逆境胁迫中ROS的清除机制 | 第17-18页 |
| 1.4 本文研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 ZmMYB59的亚细胞定位研究 | 第19-30页 |
| 2.1 实验材料与实验设备 | 第19-20页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验常用试剂及试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.4 常用试剂及培养基的配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 玉米ZmMYB59基因的克隆 | 第20-22页 |
| 2.2.1.1 玉米总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.1.2 PCR扩增玉米的ZmMYB59基因 | 第21-22页 |
| 2.2.1.3 PCR产物回收 | 第22页 |
| 2.2.1.4 PCR产物的克隆 | 第22页 |
| 2.2.2 大肠杆菌DH5 α感受态细胞的制备及转化 | 第22-23页 |
| 2.2.2.1 大肠杆菌DH5 α感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 大肠杆菌DH5 α感受态细胞的转化 | 第23页 |
| 2.2.3 重组质粒的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.3.1 菌落PCR检测 | 第23页 |
| 2.2.3.2 重组质粒DNA的提取及酶切鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.4 ZmMYB59基因亚细胞定位载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.5 日本晴水稻的转化 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-28页 |
| 2.3.1 玉米ZmMYB59基因的克隆 | 第25-27页 |
| 2.3.2 亚细胞定位载体35S::ZmMYB59-EYFP的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.3 融合表达载体35S::ZmMYB59-EYFP转化水稻原生质体的检测 | 第28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 ZmMYB59基因的启动子缺失研究 | 第30-44页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第30页 |
| 3.1.1 研究材料 | 第30页 |
| 3.1.2 实验常用试剂和试剂盒 | 第30页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 3.2.1 培养基的配制 | 第30页 |
| 3.2.1.1 LB培养基 | 第30页 |
| 3.2.1.2 NB培养基 | 第30页 |
| 3.2.2 常用试剂及溶液的配制 | 第30-31页 |
| 3.2.3 水稻基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 3.2.4 启动子序列的分析 | 第31-32页 |
| 3.2.5 引物设计及相关的PCR扩增 | 第32页 |
| 3.2.6 琼脂糖凝胶回收DNA | 第32页 |
| 3.2.7 酶切及连接反应 | 第32页 |
| 3.2.8 农杆菌EHA105感受态细胞的制备及转化 | 第32-33页 |
| 3.2.8.1 EHA105菌株感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 3.2.8.2 农杆菌感受态细胞的转化 | 第33页 |
| 3.2.9 水稻胚性愈伤转化 | 第33-34页 |
| 3.2.10 转基因苗的分子鉴定 | 第34页 |
| 3.2.11 GUS组织化学染色 | 第34-35页 |
| 3.2.11.1 GUS染色液的配制 | 第34-35页 |
| 3.2.11.2 GUS染色液组成成分 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-42页 |
| 3.3.1 ZmMYB59基因启动子片段的克隆 | 第35-37页 |
| 3.3.2 载体的构建及启动子MYB59-P,MYB59-P-2的生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 3.3.3 水稻胚性愈伤转化 | 第39-40页 |
| 3.3.4 转基因植株的PCR检测 | 第40-41页 |
| 3.3.5 转基因水稻各组织GUS活性检测 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 ZmMYB59在T_2代转基因烟草中的功能分析 | 第44-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.2 实验设备 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-48页 |
| 4.2.1 种子萌发 | 第44页 |
| 4.2.2 材料的处理 | 第44页 |
| 4.2.3 各个生理指标的测定 | 第44-48页 |
| 4.2.3.1 超氧化物歧化酶(SOD) | 第44-45页 |
| 4.2.3.2 POD、CAT酶活性的测定 | 第45-46页 |
| 4.2.3.3 丙二醛(MDA)含量的测定 | 第46-47页 |
| 4.2.3.4 脯氨酸(pro)含量的测定 | 第47页 |
| 4.2.3.5 抗坏血酸过氧化物酶活性(APX)的测定 | 第47-48页 |
| 4.2.3.6 1cm播深处理后胚轴细胞的变化 | 第48页 |
| 4.2.4 数据分析 | 第48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-51页 |
| 4.3.1 T_2代转基因烟草种子活力相关指标分析 | 第48-49页 |
| 4.3.2 表型统计分析 | 第49页 |
| 4.3.3 酶活力测定 | 第49-50页 |
| 4.3.4 转基因后对烟草胚轴细胞的影响 | 第50-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 缩略语词汇表 | 第63-64页 |
| 个人简介 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
