| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 主要英文缩写 | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第14-21页 |
| 引言 | 第21-22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-37页 |
| 1.1 材料 | 第22-25页 |
| 1.1.1 样品 | 第22-23页 |
| 1.1.2 载体、菌株、细胞和实验动物 | 第23页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 1.1.4 培养基配方 | 第23-24页 |
| 1.1.5 细胞培养液配方 | 第24页 |
| 1.1.6 电泳液配方 | 第24页 |
| 1.1.7 蛋白诱导剂 | 第24页 |
| 1.1.8 蛋白酶抑制剂 | 第24页 |
| 1.1.9 SDS-PAGE电泳试剂 | 第24-25页 |
| 1.1.10 Western-blot试剂 | 第25页 |
| 1.1.11 乳酸杆菌电转化试剂 | 第25页 |
| 1.1.12 MTT与流式细胞检测试剂 | 第25页 |
| 1.2 主要仪器 | 第25-26页 |
| 1.3 弓形虫GRA4、GRA7、GRA20、ROP20基因克隆及序列分析 | 第26-29页 |
| 1.3.1 引物设计 | 第26页 |
| 1.3.2 DNA的提取 | 第26-27页 |
| 1.3.3 PCR扩增 | 第27-28页 |
| 1.3.4 PCR产物回收和纯化 | 第28页 |
| 1.3.5 PCR产物连接 | 第28页 |
| 1.3.6 感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 1.3.7 重组质粒的转化 | 第29页 |
| 1.3.8 菌液PCR鉴定 | 第29页 |
| 1.3.9 DNA序列分析 | 第29页 |
| 1.4 弓形虫GRA4、GRA7重组乳酸菌的制备 | 第29-34页 |
| 1.4.1 引物设计 | 第29-30页 |
| 1.4.2 弓形虫DNA提取 | 第30页 |
| 1.4.3 弓形虫GRA4、GRA7基因扩增 | 第30页 |
| 1.4.4 弓形虫GRA4、GRA7基因扩增产物回收 | 第30页 |
| 1.4.5 重组质粒pMD-18T-GRA4/GRA7的构建 | 第30页 |
| 1.4.6 重组质粒pMD-18T-GRA4/GRA7和表达载体pSIP-409 的提取 | 第30-31页 |
| 1.4.7 重组质粒pMD-18T-GRA4/GRA7和表达载体pSIP-409 的双酶切 | 第31页 |
| 1.4.8 重组质粒pSIP409GRA4/GRA7的构建 | 第31页 |
| 1.4.9 重组质粒pSIP409GRA4/GRA7的转化 | 第31-32页 |
| 1.4.10 重组质粒pSIP409GRA4/GRA7的PCR鉴定 | 第32页 |
| 1.4.11 重组质粒pSIP409GRA4/GRA7的提取 | 第32页 |
| 1.4.12 重组质粒pSIP409GRA4/GRA7的双酶切鉴定 | 第32页 |
| 1.4.13 GRA4/GRA7的序列测定 | 第32页 |
| 1.4.14 植物乳杆菌(Lb.plantarum NC8)NC8感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 1.4.15 植物乳杆菌(Lb.plantarum NC8)NC8的电转化 | 第32页 |
| 1.4.16 重组乳酸菌NC8409GRA4和NC8409GRA7的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 1.4.17 乳酸菌中重组质粒pSIP409GRA4/GRA7的提取 | 第33页 |
| 1.4.18 乳酸菌中重组质粒pSIP409GRA4/GRA7的双酶切鉴定 | 第33页 |
| 1.4.19 GRA4/GRA7的序列测定 | 第33页 |
| 1.4.20 重组乳酸菌NC8409GRA4/GRA7的表达和Western Blot分析 | 第33-34页 |
| 1.5 弓形虫GRA4、GRA7重组乳酸菌疫苗的免疫效果评价 | 第34-37页 |
| 1.5.1 菌体处理和小鼠的免疫 | 第34页 |
| 1.5.2 样本采集与IgG、IgG1、IgG2a及IgA检测 | 第34-35页 |
| 1.5.3 细胞因子的检测（INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10） | 第35页 |
| 1.5.4 免疫鼠脾细胞悬液的制备 | 第35页 |
| 1.5.5 免疫鼠T淋巴细胞增殖实验（MTT） | 第35-36页 |
| 1.5.6 CD3+CD4+CD8-和CD3+CD8+CD4-细胞的检测 | 第36页 |
| 1.5.7 弓形虫RH虫株攻击保护试验 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-49页 |
| 2.1 弓形虫GRA4基因克隆及序列分析 | 第37-38页 |
| 2.1.1 GRA4基因扩增结果 | 第37页 |
| 2.1.2 GRA4基因序列分析 | 第37-38页 |
| 2.2 弓形虫GRA7基因克隆及序列分析 | 第38-39页 |
| 2.2.1 GRA7基因扩增结果 | 第38页 |
| 2.2.2 GRA7基因序列分析 | 第38-39页 |
| 2.3 弓形虫GRA20基因克隆及序列分析 | 第39-41页 |
| 2.3.1 GRA20基因扩增结果 | 第39页 |
| 2.3.2 GRA20基因序列分析 | 第39-41页 |
| 2.4 弓形虫ROP20基因克隆及序列分析 | 第41-42页 |
| 2.4.1 ROP20基因扩增结果 | 第41页 |
| 2.4.2 ROP20基因序列分析 | 第41-42页 |
| 2.5 弓形虫GRA4、GRA7重组乳酸菌的制备 | 第42-45页 |
| 2.5.1 弓形虫GRA4、GRA7基因的PCR扩增结果 | 第42页 |
| 2.5.2 重组质粒pSIP409GRA4/GRA7的鉴定结果 | 第42-43页 |
| 2.5.3 重组乳酸菌NC8409GRA4/GRA7的鉴定结果 | 第43-44页 |
| 2.5.4 重组乳酸菌NC8409GRA4/GRA7的表达结果 | 第44-45页 |
| 2.6 弓形虫GRA4、GRA7重组乳酸菌疫苗免疫效果的评价 | 第45-49页 |
| 2.6.1 IgG、IgG1、IgG2a及IgA检测结果 | 第45-47页 |
| 2.6.2 细胞因子检测结果（INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10） | 第47页 |
| 2.6.3 CD3+CD4+CD8-和CD3+CD8+CD4-细胞的检测结果 | 第47-48页 |
| 2.6.4 弓形虫RH虫株攻击保护试验结果 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-54页 |
| 3.1 弓形虫GRA4、GRA7、GRA20、ROP20基因克隆及序列分析 | 第49-50页 |
| 3.2 弓形虫GRA4、GRA7重组乳酸菌免疫效果的评价 | 第50-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 个人简介 | 第62页 |
