| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 支原体 | 第10-11页 |
| 1.1.1 支原体概况 | 第10页 |
| 1.1.2 支原体的特性 | 第10-11页 |
| 1.2 羊支原体性肺炎 | 第11页 |
| 1.3 绵羊肺炎支原体 | 第11-12页 |
| 1.4 流行病学 | 第12页 |
| 1.5 临床症状 | 第12页 |
| 1.6 诊断 | 第12-14页 |
| 1.6.1 病原的分离培养 | 第12-13页 |
| 1.6.2 病理诊断 | 第13页 |
| 1.6.3 分子生物学诊断 | 第13页 |
| 1.6.4 血清学诊断 | 第13-14页 |
| 1.7 防治 | 第14-15页 |
| 1.8 本研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 2 绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立 | 第16-24页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-19页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第17-18页 |
| 2.2.2 DNA模板的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.3 最佳退火温度的选择 | 第19页 |
| 2.2.4 最佳引物浓度的选择 | 第19页 |
| 2.2.5 双重PCR特异性试验 | 第19页 |
| 2.2.6 双重PCR敏感性试验 | 第19页 |
| 2.3 结果与分析 | 第19-22页 |
| 2.3.1 最佳退火温度的选择 | 第19-20页 |
| 2.3.2 最佳引物浓度的选择 | 第20页 |
| 2.3.3 特异性试验结果 | 第20-21页 |
| 2.3.4 敏感性试验 | 第21-22页 |
| 2.4 讨论 | 第22-24页 |
| 3 绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法的建立 | 第24-37页 |
| 3.1 试验材料 | 第24-26页 |
| 3.1.1 菌种与血清 | 第24页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第26页 |
| 3.2 试验方法 | 第26-29页 |
| 3.2.1 溶血素蛋白的表达及纯化 | 第26-27页 |
| 3.2.2 蛋白含量的测定 | 第27页 |
| 3.2.3 间接ELISA方法的建立 | 第27-29页 |
| 3.3 试验结果 | 第29-35页 |
| 3.3.1 溶血素蛋白的表达及纯化 | 第29-30页 |
| 3.3.2 蛋白含量的测定 | 第30-31页 |
| 3.3.3 蛋白最佳包被浓度及血清最佳稀释度的确定 | 第31页 |
| 3.3.4 最佳抗原包被条件的确定 | 第31-32页 |
| 3.3.5 最佳封闭液的确定 | 第32页 |
| 3.3.6 最佳封闭条件的确定 | 第32页 |
| 3.3.7 最佳血清作用时间的确定 | 第32-33页 |
| 3.3.8 酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第33页 |
| 3.3.9 酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第33页 |
| 3.3.10 底物最佳显色时间的确定 | 第33-34页 |
| 3.3.11 临界值的确定 | 第34页 |
| 3.3.12 特异性试验 | 第34页 |
| 3.3.13 敏感性试验 | 第34-35页 |
| 3.3.14 重复性试验 | 第35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 4 临床样品的检测 | 第37-44页 |
| 4.1 临床样品 | 第37页 |
| 4.2 试剂 | 第37页 |
| 4.3 试验方法 | 第37-39页 |
| 4.3.1 支原体的分离 | 第37-38页 |
| 4.3.2 PCR检测 | 第38-39页 |
| 4.3.3 间接ELISA检测 | 第39页 |
| 4.4 试验结果 | 第39-42页 |
| 4.4.1 形态学鉴定结果 | 第39-40页 |
| 4.4.2 16S rRNA PCR结果及进化树分析 | 第40-41页 |
| 4.4.3 分离培养与双重PCR结果比较 | 第41页 |
| 4.4.4 分离培养与间接ELISA结果比较 | 第41-42页 |
| 4.5 讨论 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
