| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一部分 VSV G跨膜区在融合中的作用机制 | 第10-39页 |
| 前言 | 第10-16页 |
| 材料和方法 | 第16-23页 |
| 1. 实验材料 | 第16-18页 |
| 1.1. 细胞株 | 第16页 |
| 1.2. 质粒 | 第16页 |
| 1.3. 大肠杆菌菌株 | 第16页 |
| 1.4. 主要试剂 | 第16-17页 |
| 1.5. 抗体 | 第17页 |
| 1.6. 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-23页 |
| 2.1. 细胞培养 | 第18页 |
| 2.2. Western blot | 第18-19页 |
| 2.3. 膜蛋白生物素标记实验 | 第19页 |
| 2.4. 细胞-细胞融合实验 | 第19-20页 |
| 2.5. 目的基因的定点突变 | 第20-21页 |
| 2.6. 慢病毒的制备和滴度测定 | 第21页 |
| 2.7. 细胞半融合实验 | 第21-23页 |
| 实验结果 | 第23-36页 |
| 1. VSV G介导细胞-细胞融合 | 第23-24页 |
| 2. 跨膜区的替换不会影响VSV G的表达及其在质膜的定位 | 第24-26页 |
| 2.1. VSV G跨膜区替换 | 第24-25页 |
| 2.2. 跨膜区替换不会影响VSV G的表达 | 第25页 |
| 2.3. 跨膜区替换不会影响VSV G在细胞质膜上的定位 | 第25-26页 |
| 3. 跨膜区替换显著降低VSV G的融合效率 | 第26-28页 |
| 4. 跨膜区替换显著降低VSV G介导的慢病毒感染效率 | 第28-29页 |
| 5. 跨膜区替换将融合阻断在了半融合阶段 | 第29-31页 |
| 6. VSV G的融合活性对跨膜区有序列依赖性 | 第31-36页 |
| 讨论 | 第36-38页 |
| 小结 | 第38-39页 |
| 第二部分 亚硒酸钠通过p70S6K/p53/ULK1通路诱导活性氧上调抑制保护性自噬 | 第39-85页 |
| 前言 | 第39-44页 |
| 材料和方法 | 第44-60页 |
| 1. 实验材料 | 第44-48页 |
| 1.1. 细胞株 | 第44页 |
| 1.2. 大肠杆菌菌株 | 第44页 |
| 1.3. 主要试剂 | 第44-45页 |
| 1.4. 使用的抗体 | 第45页 |
| 1.5. 靶基因siRNA序列 | 第45页 |
| 1.6. 实时定量PCR所用引物 | 第45页 |
| 1.7. 主要溶液的配制 | 第45-47页 |
| 1.8. 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2. 实验方法 | 第48-60页 |
| 2.1. 细胞培养 | 第48页 |
| 2.2. Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术凋亡检测 | 第48-49页 |
| 2.3. DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧 | 第49-50页 |
| 2.4. 免疫共沉淀 | 第50页 |
| 2.5. 免疫细胞化学染色 | 第50-51页 |
| 2.6. 细胞转染方法(RNAi和质粒的转染) | 第51-52页 |
| 2.7. 细菌的转化和质粒的提取 | 第52-53页 |
| 2.8. 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第53-57页 |
| 2.9. 裸鼠致瘤实验中脏器及肿瘤组织石蜡块制备和切片方法 | 第57-58页 |
| 2.10. 免疫组织化学染色(EnVision法) | 第58-59页 |
| 2.11. 统计分析 | 第59-60页 |
| 实验结果 | 第60-81页 |
| 1. 亚硒酸钠抑制白血病细胞自噬,诱导凋亡 | 第60-62页 |
| 1.1. 亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡 | 第60页 |
| 1.2. 亚硒酸钠抑制NB4细胞自噬 | 第60-61页 |
| 1.3. Western blot检测亚硒酸钠作用下凋亡和自噬相关蛋白的变化 | 第61-62页 |
| 2. 活性氧是亚硒酸钠诱导的细胞自噬中的上游调控因子 | 第62-68页 |
| 2.4. 亚硒酸钠诱导NB4细胞内活性氧水平上升 | 第62-63页 |
| 2.5. 亚硒酸钠诱导的活性氧介导NB4细胞凋亡 | 第63-64页 |
| 2.6. 亚硒酸钠诱导NB4细胞产生活性氧抑制自噬 | 第64-66页 |
| 2.7. Western blot检测活性氧对于细胞凋亡和自噬关键分子的变化 | 第66-67页 |
| 2.8. 亚硒酸钠诱导的活性氧不会阻断自噬流的进程 | 第67-68页 |
| 3. 活性氧通过下调NB4细胞中ULK1的表达水平抑制自噬 | 第68-69页 |
| 4. ULK1作为自噬起始物能够对抗亚硒酸钠诱导的凋亡 | 第69-72页 |
| 4.1. ULK1诱导自噬 | 第70页 |
| 4.2. ULK1抑制亚硒酸钠诱导的NB4细胞凋亡 | 第70-72页 |
| 5. p-p53(Ser392)促进ULK1的表达 | 第72-75页 |
| 5.1. p53 Ser392位磷酸化水平影响ULK1的表达 | 第72-74页 |
| 5.2. p-p53 (Ser392)与ULK1启动子结合 | 第74-75页 |
| 6. p-p70S6K介导p53 Ser392位磷酸化参与自噬调节 | 第75-79页 |
| 7. 亚硒酸钠对裸鼠异种移植瘤模型肿瘤组织内p70S6K/p53/ULK1的表达影响 | 第79-81页 |
| 讨论 | 第81-84页 |
| 小结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-95页 |
| 文献综述一 | 第95-106页 |
| 参考文献 | 第101-106页 |
| 文献综述二 | 第106-112页 |
| 参考文献 | 第111-112页 |
| 缩略词表 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 研究生在读期间参加学术活动、发表论文情况 | 第114-116页 |
