中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
绪论 | 第12-20页 |
1 骨移植 | 第12-13页 |
2 骨生物学及微环境 | 第13-14页 |
3 生物活性因子 | 第14-15页 |
4 组织工程技术 | 第15-16页 |
5 生物力学 | 第16页 |
6 基因疗法 | 第16-17页 |
7 本文设计的思路 | 第17-20页 |
第一章 胎盘源间充质干细胞的培养与鉴定 | 第20-28页 |
1.1 实验材料和仪器 | 第20-21页 |
1.2 实验方法 | 第21-23页 |
1.2.1 hPDMSCs的分离、培养 | 第21-22页 |
1.2.2 流式细胞仪检测 | 第22页 |
1.2.3 hPDMSCs的成骨诱导分化 | 第22页 |
1.2.4 hPDMSCs的成脂诱导分化 | 第22-23页 |
1.3 实验结果 | 第23-26页 |
1.3.1 细胞生长状况 | 第23-24页 |
1.3.2 流式细胞仪鉴定结果 | 第24页 |
1.3.3 von Kossa染色鉴定骨结节形成 | 第24-25页 |
1.3.4 成脂肪诱导分化结果 | 第25-26页 |
1.4 讨论 | 第26-28页 |
第二章 人LMP-1 基因重组载体的构建及在HPDMSCS的表达 | 第28-62页 |
2.1 实验材料和仪器 | 第28-29页 |
2.2 实验方法 | 第29-45页 |
2.2.1 LMP-1 载体构建 | 第29-33页 |
2.2.2 LMP-1 腺病毒包装 | 第33-35页 |
2.2.3 腺病毒PDC316-LIM1GFP感染h PDMSCs细胞 | 第35-36页 |
2.2.4 RT-qPCR检测LMP-1 基因表达 | 第36-39页 |
2.2.5 Western Blot检测LMP-1 蛋白表达 | 第39-42页 |
2.2.6 RT-qPCR检测骨钙素和II型胶原基因表达 | 第42-44页 |
2.2.7 再次鉴定转染外源性LMP-1 的hPDMSCs的多向分化能力 | 第44-45页 |
2.3 实验结果 | 第45-59页 |
2.3.1 酶切检验 | 第45页 |
2.3.2 测序结果报告单 | 第45-50页 |
2.3.3 LMP-1 腺病毒包装 | 第50-52页 |
2.3.4 RT-qPCR检测LMP-1 基因水平的表达 | 第52-54页 |
2.3.5 Western Blot检测LMP-1 蛋白表达 | 第54-55页 |
2.3.6 RT-qPCR检测骨钙素和II型胶原基因表达 | 第55-58页 |
2.3.7 转染外源性LMP-1 基因的hPDMSCs的多向分化能力鉴定 | 第58-59页 |
2.4 讨论 | 第59-62页 |
第三章 蛋白质组学分析表达外源性LMP-1 对HPDMSCS分化影响的研究 | 第62-80页 |
3.1 实验材料和仪器 | 第62-65页 |
3.1.1 实验材料 | 第62页 |
3.1.2 实验试剂 | 第62-65页 |
3.2 实验方法 | 第65-71页 |
3.2.1 第一向等电聚焦 | 第65-67页 |
3.2.2 胶条平衡 | 第67页 |
3.2.3 第二向SDS-PAGE电泳 | 第67-68页 |
3.2.4 胶内消化 | 第68-69页 |
3.2.5 质谱分析 | 第69页 |
3.2.6 蛋白鉴定 | 第69-70页 |
3.2.7 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第70-71页 |
3.3 实验结果 | 第71-76页 |
3.3.1 双向电泳及质谱鉴定 | 第71-72页 |
3.3.2 差异蛋白的质谱鉴定与分析 | 第72-76页 |
3.3.3 差异蛋白Western blot验证 | 第76页 |
3.4 讨论 | 第76-80页 |
第四章 结论 | 第80-82页 |
参考文献 | 第82-92页 |
附录 | 第92-94页 |
作者简介及科研成果 | 第94-96页 |
致谢 | 第96页 |