| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 符号说明 | 第9-12页 |
| 第一章 无脊椎动物先天免疫 | 第12-22页 |
| 一、无脊椎动物先天免疫概述 | 第12-16页 |
| 1. 物理防御 | 第12页 |
| 2. 细胞免疫 | 第12-13页 |
| 2.1 吞噬作用 | 第12-13页 |
| 2.2 包囊与结节形成 | 第13页 |
| 3. 体液免疫 | 第13-16页 |
| 3.1 酚氧化酶 | 第13-14页 |
| 3.2 溶菌酶 | 第14页 |
| 3.3 活性氧和超氧化物歧化酶 | 第14页 |
| 3.4 抗菌肽 | 第14-15页 |
| 3.5 凝集素 | 第15页 |
| 3.6 溶血素 | 第15页 |
| 3.7 血蓝蛋白 | 第15-16页 |
| 3.8 蛋白酶抑制剂 | 第16页 |
| 二、泛素化和类泛素化Neddylation与免疫应答 | 第16-20页 |
| 1. 泛素化修饰 | 第16-17页 |
| 2 泛素化在免疫中的功能 | 第17-18页 |
| 2.1 泛素化修饰在Toll信号通路中的调控 | 第17页 |
| 2.2 泛素化修饰与病毒免疫 | 第17-18页 |
| 3. 泛素化途径与类泛素化Neddylation | 第18-19页 |
| 3.1 Neddylation修饰的泛素连接酶类型Cullin-Ring ligase(CRL) | 第18-19页 |
| 4. Neddylation病毒免疫研究进展 | 第19-20页 |
| 三、本研究的科学问题及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 类泛素化Neddylation通路主要基因的序列分析、组织分布与表达模式分析以及蛋白表达纯化 | 第22-44页 |
| 一、前言 | 第22-23页 |
| 二、材料与方法 | 第23-28页 |
| 1. 材料、试剂、仪器 | 第23-24页 |
| 1.1 生物材料 | 第23页 |
| 1.2 试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 仪器 | 第24页 |
| 2. 方法 | 第24-28页 |
| 2.1 基因克隆及序列分析 | 第24页 |
| 2.2 RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.3 反转录cDNA | 第25-26页 |
| 2.4 RT-PCR与qRT-PCR | 第26-27页 |
| 2.5 重组蛋白的表达与纯化 | 第27-28页 |
| 三、结果 | 第28-43页 |
| 1. 序列分析 | 第28-38页 |
| 1.1 E1序列分析 | 第28-32页 |
| 1.2 E2序列分析 | 第32-34页 |
| 1.3 E3序列分析 | 第34-38页 |
| 2. 日本囊对虾Neddylation相关酶基因的组织分布 | 第38-39页 |
| 3. 日本囊对虾Neddylation相关酶基因的表达量在WSSV刺激后均明显上调 | 第39-42页 |
| 3.1 激活酶E1在WSSV感染对虾中的表达模式 | 第39-40页 |
| 3.2 结合酶E2在WSSV感染对虾中的表达模式 | 第40-41页 |
| 3.3 连接酶E3在WSSV感染对虾中的表达模式 | 第41-42页 |
| 4. Neddylation结合酶E2与连接酶E3的体外重组表达 | 第42-43页 |
| 四、讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 类泛素化Neddylation通路介导Dorsal转位并促进白斑综合征病毒在日本囊对虾体内的复制 | 第44-64页 |
| 一、前言 | 第44-45页 |
| 二、材料与方法 | 第45-50页 |
| 1. 材料、试剂、仪器 | 第45-46页 |
| 1.1 材料 | 第45页 |
| 1.2 试剂 | 第45页 |
| 1.3 仪器 | 第45-46页 |
| 2. 方法 | 第46-50页 |
| 2.1 RNA的提取与cDNA的合成 | 第46-47页 |
| 2.2 qRT-PCR | 第47页 |
| 2.3 基因组DNA的提取 | 第47页 |
| 2.4 蛋白提取 | 第47页 |
| 2.5 SDS-PAGE及Western blot | 第47-48页 |
| 2.6 体内RNA干扰实验 | 第48-49页 |
| 2.7 抑制剂(MLN4924)实验 | 第49页 |
| 2.7.1 MLN4924毒理测试 | 第49页 |
| 2.7.2 MLN4924抑制Neddylation后检测病毒复制 | 第49页 |
| 2.8 co-IP实验、Cactus含量检测与免疫细胞化学实验 | 第49-50页 |
| 2.8.1 co-IP实验 | 第50页 |
| 2.8.2 免疫细胞化学实验 | 第50页 |
| 三、结果 | 第50-60页 |
| 1. Neddylation通路在日本囊对虾体内有助于WSSV复制 | 第50-53页 |
| 2. 日本囊对虾体内Neddylation通路E1 (MjUBA3,MjAPPBP1)、E2(MjUBC12-1,MjUBC12-2)与E3(MjRBX1,MjDCN)均帮助WSSV在其体内复制 | 第53-59页 |
| 2.1 Nedd8激活酶基因E1 (MjUBA3与MjAPPBP1)帮助WSSV在日本囊对虾体内复制 | 第53-55页 |
| 2.2 Nedd8结合酶基因E2 (MjUBC12-1与MjUBC12-2)促进WSSV在日本囊对虾体内复制 | 第55-57页 |
| 2.3 Nedd8连接酶基因E3 (MjRBX1与MjDCN)帮助WSSV在日本囊对虾体内复制 | 第57-59页 |
| 3. Neddylation通过促进Dorsal转位来帮助WSSV在日本囊对虾体内复制 | 第59-60页 |
| 四、讨论 | 第60-64页 |
| 总结与创新点 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附件 | 第73页 |
