| 符号说明 | 第5-13页 |
| 中文摘要 | 第13-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 1 前言 | 第20-52页 |
| 1.1 全球抗药性杂草发生简述 | 第20-22页 |
| 1.2 杂草对ALS抑制剂类除草剂的抗性发生现状 | 第22-29页 |
| 1.2.1 植物ALS及其功能 | 第22-23页 |
| 1.2.2 ALS抑制剂类除草剂 | 第23-24页 |
| 1.2.3 ALS抑制剂类除草剂作用机理与选择机理 | 第24-27页 |
| 1.2.3.1 ALS抑制剂类除草剂作用机理 | 第24-26页 |
| 1.2.3.2 ALS抑制剂类除草剂对作物选择性机理 | 第26-27页 |
| 1.2.4 抗ALS抑制剂类除草剂杂草的发生和发展 | 第27-29页 |
| 1.3 杂草抗药性的产生 | 第29-30页 |
| 1.4 杂草对除草剂的抗性机理 | 第30-42页 |
| 1.4.1 杂草对ALS抑制剂的靶标抗性机理 | 第30-33页 |
| 1.4.1.1 靶标酶ALS基因突变与杂草抗药性 | 第30-32页 |
| 1.4.1.2 靶标酶过量表达 | 第32-33页 |
| 1.4.2 杂草对ALS抑制剂的非靶标抗性机理 | 第33-39页 |
| 1.4.2.1 杂草对除草剂代谢作用的增强 | 第33-38页 |
| 1.4.2.2 除草剂吸收、转运的减少 | 第38-39页 |
| 1.4.3 不同机理导致的交互抗性 | 第39-42页 |
| 1.5 抗性杂草的适合度 | 第42-44页 |
| 1.6 抗性杂草的检测方法 | 第44-50页 |
| 1.6.1 整株水平测定法 | 第44-45页 |
| 1.6.1.1 整株植物测定法 | 第44页 |
| 1.6.1.2 幼苗检测法 | 第44-45页 |
| 1.6.1.3 Resistance In-Season Quick test （RISQ）法 | 第45页 |
| 1.6.1.4 等温量热法 | 第45页 |
| 1.6.1.5 叶绿素荧光成像法 | 第45页 |
| 1.6.2 器官或组织水平测定 | 第45-46页 |
| 1.6.2.1 种子检测法 | 第45-46页 |
| 1.6.2.2 分蘖法 | 第46页 |
| 1.6.2.3 花粉萌发法 | 第46页 |
| 1.6.2.3 叶圆片浸渍技术法 | 第46页 |
| 1.6.3 细胞或细胞器水平检测方法 | 第46页 |
| 1.6.4 生化水平检测方法 | 第46-47页 |
| 1.6.5 分子水平的检测 | 第47-50页 |
| 1.6.5.1 靶标酶编码基因测序 | 第47页 |
| 1.6.5.2（衍生）酶切扩增序列多态性技术（d）CAPS | 第47页 |
| 1.6.5.3 等位基因特异性PCR （allele specific PCR ，AS-PCR） | 第47-48页 |
| 1.6.5.4 TaqMan | 第48页 |
| 1.6.5.4 SNaPshot | 第48-49页 |
| 1.6.5.5 环介导等温扩增技术LAMP | 第49页 |
| 1.6.5.6 高通量测序技术（High-throughput sequencing） | 第49-50页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第50-52页 |
| 2 材料与方法 | 第52-85页 |
| 2.1 供试材料 | 第52-54页 |
| 2.1.1 供试杂草种子采集 | 第52-53页 |
| 2.1.2 试材的培养 | 第53-54页 |
| 2.2 牛繁缕对苯磺隆的抗性水平 | 第54-55页 |
| 2.2.1 供试材料 | 第54页 |
| 2.2.2 供试药剂与施药方法 | 第54页 |
| 2.2.2.1 供试药剂 | 第54页 |
| 2.2.2.2 药剂配制 | 第54页 |
| 2.2.2.3 施药方法 | 第54页 |
| 2.2.3 牛繁缕对苯磺隆抗性鉴定 | 第54页 |
| 2.2.4 牛繁缕对苯磺隆的抗性水平 | 第54-55页 |
| 2.2.5 数据处理 | 第55页 |
| 2.3 牛繁缕对苯磺隆的抗性机理 | 第55-75页 |
| 2.3.1 ALS离体活性测定 | 第55-58页 |
| 2.3.1.1 供试材料 | 第55页 |
| 2.3.1.2 供试试剂 | 第55-56页 |
| 2.3.1.3 仪器设备 | 第56-57页 |
| 2.3.1.4 可溶性蛋白含量测定 | 第57页 |
| 2.3.1.5 乙偶姻含量测定 | 第57-58页 |
| 2.3.1.6 ALS提取 | 第58页 |
| 2.3.1.7 ALS活性测定 | 第58页 |
| 2.3.1.8 数据处理 | 第58页 |
| 2.3.2 靶标酶ALS基因差异研究 | 第58-69页 |
| 2.3.2.1 供试材料 | 第58页 |
| 2.3.2.2 供试试剂 | 第58-59页 |
| 2.3.2.3 主要仪器设备 | 第59-60页 |
| 2.3.2.4 培养基及试剂配制 | 第60-61页 |
| 2.3.2.5 牛繁缕总RNA的提取及检测 | 第61-62页 |
| 2.3.2.5.1 牛繁缕总RNA的提取 | 第61页 |
| 2.3.2.5.2 牛繁缕总RNA得率及纯度检测 | 第61-62页 |
| 2.3.2.5.3 牛繁缕总RNA完整性鉴定 | 第62页 |
| 2.3.2.6 牛繁缕cDNA第一链的合成 | 第62-63页 |
| 2.3.2.7 牛繁缕ALS基因中间片段的克隆测序 | 第63-65页 |
| 2.3.2.7.1 牛繁缕ALS基因中间片段的扩增 | 第63-64页 |
| 2.3.2.7.2 PCR产物目的条带的回收 | 第64页 |
| 2.3.2.7.3 目的DNA的连接、转化及测序 | 第64-65页 |
| 2.3.2.8 牛繁缕ALS cDNA 3′和 5′端快速扩增（RACE） | 第65-69页 |
| 2.3.2.8.1 RACE引物的设计与合成 | 第65页 |
| 2.3.2.8.2 5′ RACE模板制备 | 第65-66页 |
| 2.3.2.8.3 5′RACE PCR扩增反应体系和循环参数 | 第66-67页 |
| 2.3.2.8.4 3′RACE PCR扩增反应体系和循环参数 | 第67-68页 |
| 2.3.2.8.5 PCR产物的检测、克隆和测序鉴定 | 第68页 |
| 2.3.2.8.6 牛繁缕ALS cDNA全长结构分析 | 第68页 |
| 2.3.2.8.7 牛繁缕ALS基因DNA序列保守片段的克隆比对分析 | 第68-69页 |
| 2.3.3 ALS基因表达量差异研究 | 第69-73页 |
| 2.3.3.1 供试材料 | 第69页 |
| 2.3.3.2 供试试剂 | 第69页 |
| 2.3.3.3 总RAN的提取及质量检测 | 第69页 |
| 2.3.3.4 cDNA第一链的合成 | 第69-70页 |
| 2.3.3.5 荧光定量引物的设计 | 第70-72页 |
| 2.3.3.5.1 牛繁缕 β-actin基因的克隆与鉴定 | 第70-71页 |
| 2.3.3.5.2 牛繁缕内参基因与目的基因的引物设计与常规PCR验证 | 第71-72页 |
| 2.3.3.6 融解曲线分析及扩增效率验证 | 第72-73页 |
| 2.3.3.7 SYBR Green I法分析抗敏种群ALS基因转录水平的差异 | 第73页 |
| 2.3.4 谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）活性差异研究 | 第73-74页 |
| 2.3.4.1 供试材料 | 第73页 |
| 2.3.4.2 供试药剂 | 第73页 |
| 2.3.4.3 仪器设备 | 第73页 |
| 2.3.4.4 GSTs提取 | 第73页 |
| 2.3.4.5 GSTs活性测定 | 第73-74页 |
| 2.3.5 细胞色素P450单加氧酶（P450s）活性差异研究 | 第74-75页 |
| 2.4 不同牛繁缕种群对其它除草剂的交互抗性谱 | 第75-76页 |
| 2.5 （d）CAPS法分析ALS基因特定位点的单核苷酸多态性 | 第76-82页 |
| 2.5.1 供试材料 | 第77页 |
| 2.5.2 不同突变型牛繁缕植株的（d）CAPS分析 | 第77-82页 |
| 2.5.2.1 牛繁缕植株Pro197Glu的CAPS分析 | 第77-78页 |
| 2.5.2.2 牛繁缕植株Pro197Ala的CAPS分析 | 第78-79页 |
| 2.5.2.3 牛繁缕植株Pro197Leu的CAPS分析 | 第79-80页 |
| 2.5.2.4 牛繁缕植株Pro197Ser的CAPS分析 | 第80-81页 |
| 2.5.2.5 牛繁缕植株Pro97的dCAPS分析 | 第81-82页 |
| 2.6 ALS等位基因突变对牛繁缕ALS功能以及植株生长的影响 | 第82-85页 |
| 2.6.1 供试材料 | 第82-83页 |
| 2.6.2 供试试剂 | 第83页 |
| 2.6.3 仪器设备 | 第83页 |
| 2.6.4 ALS基因突变对牛繁缕ALS功能的影响 | 第83页 |
| 2.6.5 支链氨基酸对不同ALS等位基因突变型牛繁缕植株ALS的反馈抑制 | 第83-84页 |
| 2.6.6 不同ALS等位基因突变型牛繁缕植株生长差异 | 第84-85页 |
| 2.6.6.1 生长差异研究 | 第84页 |
| 2.6.6.2 种子萌发差异研究 | 第84-85页 |
| 3 结果与分析 | 第85-110页 |
| 3.1 牛繁缕对苯磺隆的抗性鉴定及抗性水平 | 第85-87页 |
| 3.1.1 牛繁缕对苯磺隆的抗性鉴定 | 第85页 |
| 3.1.2 牛繁缕对苯磺隆的抗性水平 | 第85-87页 |
| 3.2 牛繁缕对苯磺隆的抗性机理 | 第87-98页 |
| 3.2.1 牛血清蛋白含量标准曲线 | 第87页 |
| 3.2.2 乙偶姻（3-羟基-2 丁酮）含量标准曲线 | 第87-88页 |
| 3.2.3 ALS离体活性测定 | 第88-89页 |
| 3.2.4 靶标酶ALS基因差异研究 | 第89-94页 |
| 3.2.4.1 RNA的纯度和完整性分析 | 第89-90页 |
| 3.2.4.2 牛繁缕ALS cDNA全长分析 | 第90-92页 |
| 3.2.4.3 牛繁缕ALS保守区编码基因差异 | 第92-94页 |
| 3.2.5 ALS基因表达量差异研究 | 第94-96页 |
| 3.2.5.1 牛繁缕内参肌动蛋白 β-actin基因的克隆与鉴定 | 第94页 |
| 3.2.5.2 内参基因与目的基因引物的常规PCR验证 | 第94-95页 |
| 3.2.5.3 目的基因与内参基因引物的融解曲线分析 | 第95-96页 |
| 3.2.5.4 内参基因与目的基因引物的扩增效率验证 | 第96页 |
| 3.2.5.5 抗性与敏感种群ALS基因转录水平差异 | 第96页 |
| 3.2.6 谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）活性差异 | 第96-97页 |
| 3.2.7 细胞色素P450氧化酶（P450s）活性差异 | 第97-98页 |
| 3.3 不同牛繁缕种群对其它除草剂的交互抗性谱 | 第98-101页 |
| 3.4（d）CAPS分析牛繁缕植株ALS基因特定位点的单核苷酸多态性 | 第101-104页 |
| 3.4.1 牛繁缕植株Pro197Glu的CAPS分析 | 第101-102页 |
| 3.4.2 牛繁缕植株Pro197Ala、Pro197Leu和Pro197Ser的CAPS分析 | 第102-103页 |
| 3.4.3 牛繁缕植株Pro197的dCAPS分析 | 第103-104页 |
| 3.5 ALS等位基因突变对牛繁缕ALS功能以及植株生长的影响 | 第104-110页 |
| 3.5.1 ALS基因突变对牛繁缕ALS功能的影响 | 第105-106页 |
| 3.5.2 支链氨基酸对不同ALS等位基因突变型牛繁缕植株ALS的反馈抑制 | 第106-108页 |
| 3.5.3 不同ALS等位基因突变型牛繁缕种子发芽率差异 | 第108页 |
| 3.5.4 不同ALS等位基因突变型牛繁缕植株生长差异 | 第108-110页 |
| 4 讨论 | 第110-123页 |
| 4.1 牛繁缕对苯磺隆的抗性水平 | 第110-111页 |
| 4.2 牛繁缕对苯磺隆的抗性机理 | 第111-117页 |
| 4.2.1 牛繁缕对苯磺隆的靶标抗性机理 | 第111-114页 |
| 4.2.1.1 牛繁缕ALS对苯磺隆敏感性 | 第111页 |
| 4.2.1.2 牛繁缕对苯磺隆抗性的分子机理（靶标基因突变） | 第111-113页 |
| 4.2.1.3 牛繁缕乙酰乳酸合成酶（ALS）突变的多样性 | 第113-114页 |
| 4.2.1.4 牛繁缕乙酰乳酸合成酶（ALS）基因表达量 | 第114页 |
| 4.2.2 牛繁缕对苯磺隆非靶标抗性机理（代谢酶抗性） | 第114-117页 |
| 4.3 不同牛繁缕种群对其它除草剂的交互抗性谱 | 第117-119页 |
| 4.4 （d）CAPS快速检测方法的准确性 | 第119-120页 |
| 4.5 ALS等位基因突变对牛繁缕ALS功能以及植株生长的影响 | 第120-123页 |
| 4.5.1 牛繁缕ALS离体活性差异 | 第120-121页 |
| 4.5.2 ALS等位基因突变对牛繁缕ALS功能影响 | 第121-122页 |
| 4.5.3 ALS等位基因突变对牛繁缕植株生长影响 | 第122-123页 |
| 5 结论 | 第123-125页 |
| 6 论文创新与有待研究之处 | 第125-126页 |
| 7 参考文献 | 第126-154页 |
| 8 致谢 | 第154-155页 |
| 9 攻读学位期间论文发表情况 | 第155-158页 |
| 附表 | 第158-159页 |
| 附图 | 第159-160页 |
