摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-21页 |
第一节 20S蛋白酶体 | 第12-13页 |
第二节 泛素-蛋白酶体降解系统 | 第13-15页 |
第三节 REGγ的发现及其生化特性 | 第15页 |
第四节 REGγ-20S蛋白酶体系统及其降解底物 | 第15-17页 |
第五节 雄性生殖系统及精子发生过程 | 第17-18页 |
第六节 精原干细胞及其调控 | 第18-20页 |
第七节 REGγ与雄性生殖 | 第20-21页 |
第二章 材料与方法 | 第21-31页 |
第一节 实验材料 | 第21页 |
1. C57/BL6J小鼠 | 第21页 |
2. C18-4细胞系 | 第21页 |
第二节 实验方法 | 第21-31页 |
1. 小鼠基因型的鉴定 | 第21-22页 |
2. Western Blot | 第22-24页 |
3. 总RNA的提取与Real-Time PCR | 第24-26页 |
4. 小鼠精子浓度及活力测定 | 第26页 |
5. 体内超排受孕实验 | 第26页 |
6. 石蜡切片的制备与组织的免疫荧光染色 | 第26-27页 |
7. TUNEL法原位检测细胞凋亡 | 第27-28页 |
8. 流式细胞仪分析细胞周期 | 第28页 |
9. C18-4 REGγ敲除稳定细胞株的建立 | 第28-29页 |
10. MTT检测细胞增殖 | 第29页 |
11. 荧光素酶检测法(Luciferase Assay) | 第29-30页 |
12. 数据统计方法 | 第30-31页 |
第三章 结果与分析 | 第31-48页 |
第一节 REGγ影响雄性小鼠的生殖能力 | 第31-35页 |
1. REGγ敲除型雄鼠后代数目少 | 第31-32页 |
2. REGγ敲除型雄鼠精子浓度与精子活力低 | 第32-33页 |
3. REGγ敲除型老龄雄鼠睾丸组织退化程度严重 | 第33-35页 |
第二节 REGγ影响睾丸组织中细胞的凋亡水平 | 第35-41页 |
1. REGγ基因敲除型小鼠睾丸组织中细胞凋亡水平升高 | 第35-36页 |
2. REGγ敲除型小鼠睾丸组织对cisplatin的敏感度更高 | 第36-38页 |
3. 睾丸组织中凋亡水平与p53水平成正比且凋亡的细胞主要为初级精母细胞 | 第38-41页 |
第三节 REGγ与精原干细胞 | 第41-48页 |
1. REGγ在精原干细胞中的表达 | 第41-42页 |
2. REGγ敲除小鼠睾丸组织中精原干细胞数目随年龄的增加而减少 | 第42-44页 |
3. REGγ对C18-4细胞增殖、分化、自我更新的影响 | 第44-45页 |
4. p53对PLZF的调控 | 第45-48页 |
第四章 讨论 | 第48-50页 |
附录 | 第50-53页 |
参考文献 | 第53-57页 |
后记 | 第57页 |