| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 英文缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 褐飞虱的发生和危害 | 第13-14页 |
| 1.2 昆虫体内的微生物共生菌 | 第14-16页 |
| 1.2.1 类酵母菌的形态特征及分布 | 第15页 |
| 1.2.2 共生菌传递方式 | 第15-16页 |
| 1.2.3 类酵母菌系统进化 | 第16页 |
| 1.3 昆虫与共生菌的营养关系 | 第16-18页 |
| 1.4 支链氨基酸的合成 | 第18-19页 |
| 1.5 芳香族氨基酸的合成 | 第19-25页 |
| 1.6 本实验研究的背景、目的及实验意义 | 第25-27页 |
| 第二章 褐飞虱支链氨基酸、芳香族氨基酸合成相关基因的分子克隆与结构分析 | 第27-41页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-37页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第28页 |
| 2.1.2.1 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.2.2 主要仪器设备 | 第28页 |
| 2.1.3 褐飞虱芳香族、支链氨基酸合成基因片段的筛选和验证 | 第28-34页 |
| 2.1.3.1 褐飞虱氨基酸合成相关基因片段获得 | 第29页 |
| 2.1.3.2 总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.1.3.3 cDNA第一条链的合成 | 第30页 |
| 2.1.3.4 PCR引物设计与合成 | 第30-31页 |
| 2.1.3.5 PCR反应体系及反应条件 | 第31页 |
| 2.1.3.6 回收目标DNA的PCR产物 | 第31-32页 |
| 2.1.3.7 目标PCR产物的连接和连接产物的转化 | 第32-33页 |
| 2.1.3.8 菌液PCR、凝胶电泳检测 | 第33页 |
| 2.1.3.9 序列测定 | 第33-34页 |
| 2.1.4 褐飞虱芳香族、支链氨基酸合成过程中基因的全长克隆 | 第34-36页 |
| 2.1.4.1 PCR的引物设计与合成 | 第34-35页 |
| 2.1.4.2 RACE反应体系、反应条件 | 第35-36页 |
| 2.1.4.3 目标PCR产物的回收、连接、转化,单克隆挑取及菌液测序 | 第36页 |
| 2.1.4.4 RACE产物测序完成片段分析 | 第36页 |
| 2.1.5 基因的结构分析 | 第36-37页 |
| 2.2 结果与分析 | 第37-39页 |
| 2.2.1 相关基因的克隆 | 第37页 |
| 2.2.2 支链氨基酸合成相关基因 | 第37-38页 |
| 2.2.3 芳香族氨基酸合成相关基因 | 第38-39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 支链氨基酸转氨酶和预苯酸酸脱氢酶基因的来源分析 | 第41-47页 |
| 3.1 材料与方法 | 第41-43页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第41-42页 |
| 3.1.3 支链氨基酸转氨酶、预苯酸脱氢酶的分子克隆 | 第42-43页 |
| 3.1.3.1 引物设计 | 第42页 |
| 3.1.3.2 总DNA提取 | 第42-43页 |
| 3.1.4 进化分析 | 第43页 |
| 3.1.5 基因来源分析 | 第43页 |
| 3.2 结果与分析 | 第43-46页 |
| 3.2.1 支链氨基酸转氨酶的进化关 | 第43-44页 |
| 3.2.2 预苯酸脱氢酶的进化关系 | 第44-45页 |
| 3.2.3 支链氨基酸转氨酶与预苯酸脱氢酶的来源分析 | 第45-46页 |
| 3.3 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 褐飞虱体内支链氨基酸转氨酶和预苯酸脱氢酶基因的表达动态及RNAi分析 | 第47-61页 |
| 4.1 材料与方法 | 第47-55页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第47-48页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第48页 |
| 4.1.2.1 主要试剂 | 第48页 |
| 4.1.2.2 主要仪器及设备 | 第48页 |
| 4.1.3 dsRNA合成和纯化 | 第48-52页 |
| 4.1.3.1 dsRNA片段的引物设计 | 第48-49页 |
| 4.1.3.2 dsRNA目标基因的克隆 | 第49页 |
| 4.1.3.3 质粒提取 | 第49-50页 |
| 4.1.3.4 质粒PCR | 第50页 |
| 4.1.3.5 目标片段回收、纯化 | 第50-51页 |
| 4.1.3.6 dsRNA体外合成 | 第51页 |
| 4.1.3.7 降解DNA和RNA单链 | 第51-52页 |
| 4.1.3.8 dsRNA的纯化 | 第52页 |
| 4.1.4 dsRNA饲喂 | 第52-53页 |
| 4.1.4.1 褐飞虱食用饲料配制 | 第52页 |
| 4.1.4.2 褐飞虱dsRNA人工饲料饲喂 | 第52-53页 |
| 4.1.5 实时定量PCR测定 | 第53-54页 |
| 4.1.5.1 总RNA提取 | 第53页 |
| 4.1.5.2 第一链cDNA的合成 | 第53页 |
| 4.1.5.3 qRT-PCR引物设计 | 第53-54页 |
| 4.1.5.4 实时荧光定量PCR反应 | 第54页 |
| 4.1.6 数据处理与结果分析 | 第54-55页 |
| 4.2 结果与分析 | 第55-60页 |
| 4.2.1 褐飞虱不同龄期体内NIBCAT的表达动态 | 第55-56页 |
| 4.2.2 褐飞虱体内NIPDH基因的龄期表达 | 第56-57页 |
| 4.2.3 褐飞虱体内dsNIBCAT的RNA干扰效应 | 第57-58页 |
| 4.2.4 褐飞虱体内dsNIPDH的RNA干扰效应 | 第58-60页 |
| 4.3 讨论 | 第60-61页 |
| 全文总结 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
