| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 缩略词表 | 第11-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-34页 |
| 1 植物开花调控的分子机理 | 第18-24页 |
| 1.1 光周期途径 | 第18-19页 |
| 1.2 春化作用途径 | 第19-20页 |
| 1.3 自主途径 | 第20-21页 |
| 1.4 赤霉素(GA)途径 | 第21页 |
| 1.5 开花抑制基因FLC | 第21-23页 |
| 1.6 各途径之间信号整合因子 | 第23-24页 |
| 2 TFL1基因研究进展 | 第24-27页 |
| 2.1 PEBP基因家族 | 第24页 |
| 2.2 TFL1基因的功能 | 第24-26页 |
| 2.3 甘蓝型油菜BnTFL1基因的研究概况 | 第26-27页 |
| 3 甘蓝型油菜子叶和下胚轴再生培养研究概况 | 第27-30页 |
| 3.1 外植体取材方式及部位 | 第27页 |
| 3.2 培养方式 | 第27-28页 |
| 3.3 预培养时间 | 第28页 |
| 3.4 2,4-D | 第28-29页 |
| 3.5 6-BA | 第29页 |
| 3.6 NAA | 第29页 |
| 3.7 AgNO_3 | 第29-30页 |
| 3.8 基因型 | 第30页 |
| 3.9 苗龄 | 第30页 |
| 4 农杆菌介导的甘蓝型油菜子叶和下胚轴的遗传转化研究概况 | 第30-33页 |
| 4.1 外植体预培养对转化的影响 | 第31页 |
| 4.2 农杆菌菌液浓度和侵染时间对转化的影响 | 第31页 |
| 4.3 共培养对转化的影响 | 第31-32页 |
| 4.4 抗生素浓度对转化的影响 | 第32页 |
| 4.5 乙酰丁香酮(AS)对转化的影响 | 第32页 |
| 4.6 AgNO_3对转化的影响 | 第32-33页 |
| 5 研究的目的与意义 | 第33-34页 |
| 第二章 BnTFL1基因的克隆及序列分析 | 第34-62页 |
| 1 材料与方法 | 第34-38页 |
| 1.1 油菜材料 | 第34页 |
| 1.2 菌株与载体 | 第34页 |
| 1.3 主要试剂 | 第34页 |
| 1.4 培养基的配制 | 第34-35页 |
| 1.5 主要仪器 | 第35页 |
| 1.6 实验中使用的引物 | 第35-36页 |
| 1.7 油菜基因组DNA的提取 | 第36页 |
| 1.8 油菜茎尖总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第36页 |
| 1.9 BnTFL1基因的基因组DNA和cDNA克隆 | 第36页 |
| 1.10 PCR产物的回收与纯化 | 第36-37页 |
| 1.11 回收DNA片段与pMD18-T载体连接及连接产物转化大肠杆菌 | 第37页 |
| 1.12 阳性克隆的菌落PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 1.13 序列分析 | 第38页 |
| 1.14 系统进化分析 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-60页 |
| 2.1 BnTFL1的cDNA克隆与序列分析 | 第38-47页 |
| 2.2 BnTFL1-1p、BnTFL1-2p、BnTFLl-3p、BnTFL1-4p和BnTFL1-5p的分析 | 第47-55页 |
| 2.3 BnTFL1基因组DNA克隆与序列分析 | 第55-60页 |
| 3 讨论 | 第60页 |
| 4 小结 | 第60-62页 |
| 第三章 BnTFL1基因的表达分析 | 第62-77页 |
| 1 材料与方法 | 第62-67页 |
| 1.1 油菜材料 | 第62页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第62页 |
| 1.3 主要仪器 | 第62页 |
| 1.4 荧光定量实验中使用的引物 | 第62-63页 |
| 1.5 样品RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第63-64页 |
| 1.6 不同组织/器官中BnTFL1的表达 | 第64-65页 |
| 1.7 实时荧光定量PCR(RT-qPCR) | 第65-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-76页 |
| 2.1 不同组织/器官中BnTFL1的表达结果 | 第67页 |
| 2.2 BnTFL1各同源基因特异荧光定量引物对的扩增及扩增产物测序结果 | 第67-69页 |
| 2.3 BnTFL1各同源基因引物对的标准曲线 | 第69-70页 |
| 2.4 UBC21基因引物的标准曲线和表达分析 | 第70-71页 |
| 2.5 BnTFL1各同源基因的表达分析 | 第71-76页 |
| 3 讨论 | 第76页 |
| 4 小结 | 第76-77页 |
| 第四章 BnTFL1-1和BnTFL1-3基因启动子的克隆与序列分析 | 第77-89页 |
| 1 材料与方法 | 第77-80页 |
| 1.1 油菜材料 | 第77页 |
| 1.2 载体与大肠杆菌感受态细胞 | 第77页 |
| 1.3 主要试剂 | 第77页 |
| 1.4 LB培养基的配制 | 第77-78页 |
| 1.5 主要仪器 | 第78页 |
| 1.6 实验中使用的引物 | 第78页 |
| 1.7 油菜基因组DNA的提取 | 第78页 |
| 1.8 BnTFL1-1和BnTFL1-3基因启动子的克隆 | 第78-79页 |
| 1.9 PCR产物的回收与纯化 | 第79页 |
| 1.10 回收DNA片段与pMD18-T载体的连接及连接产物转化大肠杆菌 | 第79页 |
| 1.11 阳性克隆的菌落PCR鉴定 | 第79-80页 |
| 1.12 BnTFL1-1-promoter和BnTFL1-3-promoter序列分析 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-88页 |
| 2.1 PCR扩增 | 第80页 |
| 2.2 BnTFL1-1-promoter和BnTFL1-3-promoter的序列分析 | 第80-88页 |
| 3 讨论 | 第88页 |
| 4 小结 | 第88-89页 |
| 第五章 BnTFL1基因过表达载体和RNAi载体的构建及转化农杆菌 | 第89-107页 |
| 1 BnTFL1基因过表达载体的构建 | 第89-96页 |
| 1.1 材料与方法 | 第89-93页 |
| 1.2 结果分析 | 第93-96页 |
| 2 BnTFL1基因RNAi载体的构建 | 第96-104页 |
| 2.1 材料与方法 | 第96-100页 |
| 2.2 结果与分析 | 第100-104页 |
| 3 BnTFL1基因过表达载体PRI101-BnTFL1和RNAi载体pFCG5941-BnTFL1转化农杆菌 | 第104-106页 |
| 3.1 材料与方法 | 第104-106页 |
| 3.2 结果与分析 | 第106页 |
| 4 小结 | 第106-107页 |
| 第六章 BnTFL1基因转化拟南芥的研究 | 第107-120页 |
| 1 材料和方法 | 第107-110页 |
| 1.1 材料 | 第107页 |
| 1.2 试剂与耗材 | 第107页 |
| 1.3 主要仪器 | 第107页 |
| 1.4 常用溶液和培养基的配制 | 第107-108页 |
| 1.5 采用花序浸泡法进行拟南芥的遗传转化 | 第108-109页 |
| 1.6 拟南芥转化体的筛选 | 第109页 |
| 1.7 拟南芥转BnTFL1-1c基因T0代植株的PCR检测 | 第109页 |
| 1.8 拟南芥转BnTFL1-1c基因T1代植株的种植 | 第109-110页 |
| 1.9 拟南芥转BnTFL1-1c基因T1代植株的PCR检测 | 第110页 |
| 2 结果与分析 | 第110-118页 |
| 2.1 拟南芥转BnTFL1-1c基因T0和T1代植株的PCR检测 | 第110页 |
| 2.2 拟南芥转BnTFL1-1c基因T1代植株的生长情况 | 第110-118页 |
| 3 讨论 | 第118-119页 |
| 4 小结 | 第119-120页 |
| 第七章 BnTFL1基因RNAi载体转化甘蓝型油菜的研究 | 第120-134页 |
| 1 材料和方法 | 第120-122页 |
| 1.1 材料 | 第120页 |
| 1.2 试剂与耗材 | 第120页 |
| 1.3 主要仪器 | 第120页 |
| 1.4 常用溶液和培养基的配制 | 第120-121页 |
| 1.5 油菜的遗传转化 | 第121页 |
| 1.6 抗性苗的PCR检测 | 第121-122页 |
| 1.7 转基因植株的观测 | 第122页 |
| 2 结果与分析 | 第122-132页 |
| 2.1 甘蓝型油菜的遗传转化 | 第122-123页 |
| 2.2 抗性苗PCR检测结果 | 第123-125页 |
| 2.3 转基因植株生长发育情况观测 | 第125-132页 |
| 3 讨论 | 第132页 |
| 4 小结 | 第132-134页 |
| 第八章 甘蓝型油菜子叶和下胚轴再生培养及遗传转化的优化 | 第134-155页 |
| 1 材料和试剂 | 第134-136页 |
| 1.1 材料 | 第134页 |
| 1.2 试剂和耗材 | 第134页 |
| 1.3 主要仪器 | 第134页 |
| 1.4 常用溶液和培养基的配制 | 第134-136页 |
| 1.5 实验中使用的引物对 | 第136页 |
| 2 甘蓝型油菜子叶遗传转化研究 | 第136-138页 |
| 2.1 甘蓝型油菜含子叶节分生组织的子叶一步培养的研究 | 第136-137页 |
| 2.2 基于甘蓝型油菜含子叶节分生组织的子叶一步培养的遗传转化方法 | 第137-138页 |
| 3 甘蓝型油菜下胚轴遗传转化研究 | 第138-139页 |
| 3.1 甘蓝型油菜含子叶节分生组织的下胚轴一步培养的研究 | 第138页 |
| 3.2 基于甘蓝型油菜含子叶节分生组织的下胚轴一步再生培养的遗传转化方法 | 第138-139页 |
| 4 转基因植株的分子检测 | 第139-140页 |
| 5 结果与分析 | 第140-152页 |
| 5.1 6-BA和NAA对子叶外植体不定芽再生培养的影响 | 第140-142页 |
| 5.2 AgNO_3对子叶外植体不定芽再生培养的影响 | 第142页 |
| 5.3 不同苗龄子叶外植体不定芽再生培养的情况 | 第142-143页 |
| 5.4 A3-1培养基诱导不同基因型油菜子叶外植体不定芽再生培养的结果 | 第143页 |
| 5.5 基于甘蓝型油菜子叶一步再生培养的遗传转化结果 | 第143-146页 |
| 5.6 6-BA和NAA对下胚轴外植体不定芽再生培养的影响 | 第146-147页 |
| 5.7 AgNO_3对下胚轴外植体不定芽再生培养的影响 | 第147-148页 |
| 5.8 不同苗龄下胚轴外植体不定芽再生培养的情况 | 第148页 |
| 5.9 基于甘蓝型油菜下胚轴一步培养的遗传转化结果 | 第148-152页 |
| 6 讨论 | 第152-154页 |
| 6.1 激素 | 第152页 |
| 6.2 AgNO_3 | 第152-153页 |
| 6.3 基因型 | 第153页 |
| 6.4 苗龄 | 第153页 |
| 6.5 一步培养及遗传转化 | 第153-154页 |
| 7 小结 | 第154-155页 |
| 主要结论与创新点 | 第155-157页 |
| 1 主要结论 | 第155-156页 |
| 2 创新点 | 第156页 |
| 3 下一步研究工作设想 | 第156-157页 |
| 参考文献 | 第157-170页 |
| 致谢 | 第170-171页 |
| 作者简介 | 第171页 |
