| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 猪流行性腹泻病毒的研究进展 | 第12-30页 |
| 1 PEDV分子生物学特性 | 第12-16页 |
| ·病毒的形态学及理化特性 | 第12-13页 |
| ·PEDV培养特性 | 第13页 |
| ·基因组结构及编码蛋白 | 第13-16页 |
| ·非结构蛋白及其功能 | 第14-15页 |
| ·结构蛋白及其功能 | 第15-16页 |
| 2 PEDV分子流行病学 | 第16-17页 |
| 3 诊断技术 | 第17-18页 |
| 4 疫苗 | 第18-22页 |
| ·传统疫苗 | 第18-19页 |
| ·灭活疫苗 | 第18-19页 |
| ·弱毒疫苗 | 第19页 |
| ·基因工程疫苗 | 第19-21页 |
| ·转基因植物疫苗 | 第19-20页 |
| ·乳酸杆菌疫苗 | 第20页 |
| ·核酸疫苗 | 第20页 |
| ·单位疫苗 | 第20-21页 |
| ·联苗 | 第21-22页 |
| 5 治疗 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-30页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒M和S蛋白多克隆抗体的制备及鉴定 | 第30-50页 |
| 摘要 | 第30-31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-40页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-40页 |
| ·Ma和Sa基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·Ma和Sa基因的回收 | 第32-33页 |
| ·Ma和Sa重组质粒载体的构建 | 第33-36页 |
| ·Ma和Sa重组蛋白的表达和鉴定 | 第36-38页 |
| ·Ma和Sa蛋白的纯化 | 第38页 |
| ·Ma和Sa蛋白多克隆抗体的制备 | 第38页 |
| ·间接ELISA方法检测多抗效价 | 第38-39页 |
| ·多克隆抗体的Western-blot鉴定 | 第39页 |
| ·多克隆抗体的IFA鉴定 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-44页 |
| ·Ma和Sa基因的扩增 | 第40页 |
| ·重组质粒pET-32a-Ma和pGEX-6p-1-Sa的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·Ma和Sa蛋白的诱导表达和鉴定 | 第41-42页 |
| ·多克隆抗体效价的测定 | 第42页 |
| ·多克隆抗体的Western-blot鉴定 | 第42-43页 |
| ·多克隆抗体的IFA鉴定 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| ABSTRACT | 第48-50页 |
| 第三章 PEDV Sc蛋白间接ELISA方法的建立及其与中和试验相关性的研究 | 第50-68页 |
| 摘要 | 第50-51页 |
| 1 材料与方法 | 第51-55页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-55页 |
| ·Sc基因的PCR扩增及重组质粒pET-28a-Sc的构建 | 第51-52页 |
| ·Sc重组蛋白的表达、鉴定和纯化 | 第52-53页 |
| ·间接ELISA术式 | 第53页 |
| ·Sc蛋白间接ELISA方法的条件优化 | 第53-54页 |
| ·间接ELISA阴阳性临界值的确定 | 第54页 |
| ·间接ELISA的重复性、敏感性和特异性试验 | 第54-55页 |
| ·间接ELISA结果和中和试验结果的相关性研究 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-65页 |
| ·目的基因的扩增及重组质粒的鉴定 | 第55-56页 |
| ·Sc蛋白的表达、鉴定和纯化 | 第56-57页 |
| ·间接ELISA最佳反应条件的确定 | 第57-62页 |
| ·间接ELISA临界值的确定 | 第62-63页 |
| ·间接ELISA的重复性、敏感性和特异性试验 | 第63-64页 |
| ·间接ELISA结果和中和试验结果的相关性 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-67页 |
| ABSTRACT | 第67-68页 |
| 第四章 猪流行性腹泻病毒(PEDV)病毒样颗粒(VLPS)的构建和免疫原性研究 | 第68-92页 |
| 摘要 | 第68-69页 |
| 1 材料与方法 | 第69-81页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-81页 |
| ·PEDV M、E和S基因扩增引物的设计 | 第69-70页 |
| ·目的基因的扩增 | 第70-71页 |
| ·重组质粒pFast-ME和pFast-S的构建 | 第71-75页 |
| ·重组Bacmid的构建与鉴定 | 第75-77页 |
| ·重组杆状病毒的获得与增殖 | 第77-78页 |
| ·重组M、E和S蛋白在Sf9细胞中的表达与鉴定 | 第78页 |
| ·病毒样颗粒(VLPS)的获得、纯化以及电镜观察 | 第78-79页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第79页 |
| ·ELISA抗体检测 | 第79-80页 |
| ·中和抗体检测 | 第80-81页 |
| 2 结果 | 第81-86页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第81页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第81-82页 |
| ·重组Bacmid的PCR鉴定 | 第82-83页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第83页 |
| ·重组蛋白的Western-blot鉴定 | 第83-84页 |
| ·蔗糖密度梯度离心 | 第84-85页 |
| ·电镜观察 | 第85页 |
| ·ELISA抗体效价 | 第85-86页 |
| ·中和抗体效价 | 第86页 |
| 3 讨论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-90页 |
| ABSTRACT | 第90-92页 |
| 全文总结 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
