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S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因工程菌的构建及活性分析

摘要第1-10页
Abstract第10-14页
第一章 前言第14-24页
   ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶第14-24页
     ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶概论第14-15页
     ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶作用底物的生成第15-17页
       ·S-腺苷高半胱氨酸再次甲基化途径第16页
       ·S-腺苷高半胱氨酸转硫基途径第16-17页
     ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶的结构第17-18页
     ·SAHH蛋白表达系统的选择第18-21页
       ·大肠杆菌表达系统第19页
       ·酵母菌表达系统第19-21页
     ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶研究进展第21-24页
第二章 实验材料、仪器与方法第24-40页
   ·实验材料第24-25页
   ·实验仪器第25-26页
   ·实验试剂和培养基的配制第26-27页
     ·实验试剂的配制第26页
     ·培养基的配制第26-27页
   ·实验方法第27-40页
     ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因sahh的获得第27-28页
       ·人源sahh基因的选择第27-28页
       ·全基因合成基因序列构建载体及PCR引物设计第28页
     ·目的基因的获取第28-31页
       ·大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备第28页
       ·转化大肠杆菌DH5α 感受态细胞第28-29页
       ·阳性克隆菌体的鉴定第29-30页
       ·双酶切反应检验质粒第30页
       ·线性化质粒第30-31页
       ·线性化质粒的胶回收第31页
     ·毕赤酵母菌GS115表达载体的构建第31-34页
       ·毕赤酵母菌GS115感受态细胞的制备第32页
       ·毕赤酵母菌GS115电转化第32-33页
       ·毕赤酵母GS115转化子的筛选与鉴定第33-34页
     ·毕赤酵母GS115转化子产酶的诱导第34-35页
       ·甲醇诱导GS115转化子表达SAHH第34-35页
       ·SAHH蛋白液的浓缩第35页
     ·亲和层析第35-38页
       ·SAHH蛋白亲和层析第35-36页
       ·SAHH蛋白洗脱液除盐第36页
       ·SDS-PAGE定量分析SAHH蛋白第36-38页
     ·SAHH蛋白活性测定第38-40页
       ·SAHH蛋白活性测定的原理第38页
       ·制作标准曲线第38页
       ·SAHH蛋白活性测定方法第38-40页
第三章 实验结果与分析第40-52页
   ·PPIC9K、PPIC9K-SAHH质粒的提取第40-41页
   ·PPIC9K-SAHH双酶切反应验证第41-42页
   ·PPIC9K-SAHH和PPIC9K质粒线性化第42-43页
   ·线性化质粒PPIC9K-SAHH和PPIC9K的胶回收第43-44页
   ·转化子筛选与验证第44-47页
     ·高拷贝转化子的筛选第44-46页
     ·PCR产物测序第46-47页
   ·聚丙烯酰胺凝胶电泳结果第47-49页
   ·SAHH蛋白活性测定第49-52页
     ·半胱氨酸标准曲线的绘制第49-50页
     ·SAHH蛋白活性测定第50-52页
第四章 结论与展望第52-54页
参考文献第54-60页
致谢第60-62页
附录第62页

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