| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-24页 |
| ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶 | 第14-24页 |
| ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶概论 | 第14-15页 |
| ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶作用底物的生成 | 第15-17页 |
| ·S-腺苷高半胱氨酸再次甲基化途径 | 第16页 |
| ·S-腺苷高半胱氨酸转硫基途径 | 第16-17页 |
| ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶的结构 | 第17-18页 |
| ·SAHH蛋白表达系统的选择 | 第18-21页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第19页 |
| ·酵母菌表达系统 | 第19-21页 |
| ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶研究进展 | 第21-24页 |
| 第二章 实验材料、仪器与方法 | 第24-40页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·实验仪器 | 第25-26页 |
| ·实验试剂和培养基的配制 | 第26-27页 |
| ·实验试剂的配制 | 第26页 |
| ·培养基的配制 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因sahh的获得 | 第27-28页 |
| ·人源sahh基因的选择 | 第27-28页 |
| ·全基因合成基因序列构建载体及PCR引物设计 | 第28页 |
| ·目的基因的获取 | 第28-31页 |
| ·大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α 感受态细胞 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆菌体的鉴定 | 第29-30页 |
| ·双酶切反应检验质粒 | 第30页 |
| ·线性化质粒 | 第30-31页 |
| ·线性化质粒的胶回收 | 第31页 |
| ·毕赤酵母菌GS115表达载体的构建 | 第31-34页 |
| ·毕赤酵母菌GS115感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·毕赤酵母菌GS115电转化 | 第32-33页 |
| ·毕赤酵母GS115转化子的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母GS115转化子产酶的诱导 | 第34-35页 |
| ·甲醇诱导GS115转化子表达SAHH | 第34-35页 |
| ·SAHH蛋白液的浓缩 | 第35页 |
| ·亲和层析 | 第35-38页 |
| ·SAHH蛋白亲和层析 | 第35-36页 |
| ·SAHH蛋白洗脱液除盐 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE定量分析SAHH蛋白 | 第36-38页 |
| ·SAHH蛋白活性测定 | 第38-40页 |
| ·SAHH蛋白活性测定的原理 | 第38页 |
| ·制作标准曲线 | 第38页 |
| ·SAHH蛋白活性测定方法 | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第40-52页 |
| ·PPIC9K、PPIC9K-SAHH质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·PPIC9K-SAHH双酶切反应验证 | 第41-42页 |
| ·PPIC9K-SAHH和PPIC9K质粒线性化 | 第42-43页 |
| ·线性化质粒PPIC9K-SAHH和PPIC9K的胶回收 | 第43-44页 |
| ·转化子筛选与验证 | 第44-47页 |
| ·高拷贝转化子的筛选 | 第44-46页 |
| ·PCR产物测序 | 第46-47页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第47-49页 |
| ·SAHH蛋白活性测定 | 第49-52页 |
| ·半胱氨酸标准曲线的绘制 | 第49-50页 |
| ·SAHH蛋白活性测定 | 第50-52页 |
| 第四章 结论与展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
| 附录 | 第62页 |