| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-26页 |
| ·植物转基因抗寒育种研究进展 | 第14-16页 |
| ·膜稳定相关基因 | 第15页 |
| ·抗氧化酶基因 | 第15-16页 |
| ·抗冻蛋白基因 | 第16页 |
| ·低温信号转录因子 | 第16页 |
| ·CBF转录因子研究进展 | 第16-21页 |
| ·CBF转录因子的发现 | 第16-17页 |
| ·CBF转录因子的结构特征 | 第17-18页 |
| ·CBF基因的表达调控 | 第18-20页 |
| ·CBF基因对COR基因的表达调控 | 第20-21页 |
| ·CBF基因改良植物耐寒性的应用 | 第21页 |
| ·基因克隆和表达分析方法 | 第21-24页 |
| ·同源克隆 | 第21页 |
| ·RACE技术 | 第21-22页 |
| ·半定量PCR技术 | 第22页 |
| ·实时定量PCR技术 | 第22-23页 |
| ·内参基因在定量PCR技术中的应用 | 第23-24页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-44页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·酶与生化试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·常规实验方法与操作步骤 | 第27-30页 |
| ·总RNA的提取及第一链cDNA的合成 | 第27页 |
| ·目的片段回收及与T-载体的连接 | 第27-28页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选 | 第28页 |
| ·A-T克隆的菌落PCR及测序 | 第28-29页 |
| ·实时定量PCR | 第29-30页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·香樟内参基因的克隆及稳定性分析 | 第30-33页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·香樟Cc ACT基因及CcEF1α 基因片段的扩增 | 第31-32页 |
| ·香樟Cc ACT基因及CcEF1α 基因的生物信息学分析 | 第32页 |
| ·植物材料的低温处理及取样 | 第32页 |
| ·香樟Cc ACT基因及CcEF1α 基因的实时定量表达分析 | 第32页 |
| ·实时定量PCR数据处理与分析 | 第32-33页 |
| ·香樟CcCBF基因的克隆 | 第33-37页 |
| ·香樟叶片总RNA的提取及反转录 | 第33页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·香樟CcCBF基因中间片段的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·RACE扩增香樟CcCBF基因 3’/5’末端 | 第34-37页 |
| ·香樟CcCBF基因的生物信息学分析 | 第37页 |
| ·香樟CcCBF基因的表达分析 | 第37-38页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·胁迫处理 | 第38页 |
| ·总RNA的提取和cDNA的合成 | 第38页 |
| ·香樟CcCBF基因的实时定量PCR检测 | 第38页 |
| ·香樟CcCBF基因表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·菌株的活化和质粒的提取 | 第38-39页 |
| ·质粒的双酶切及回收 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第40页 |
| ·转香樟CcCBFb基因烟草的获得 | 第40-44页 |
| ·重组质粒转化农杆菌EHA105 | 第40-41页 |
| ·烟草的遗传转化及再生 | 第41页 |
| ·转香樟CcCBFb基因烟草的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·转基因烟草的半定量PCR分析 | 第42页 |
| ·转基因烟草的抗逆性分析 | 第42-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-64页 |
| ·香樟内参基因的克隆及稳定性分析 | 第44-52页 |
| ·总RNA的提取 | 第44页 |
| ·PCR扩增产物的鉴定 | 第44页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第44-45页 |
| ·测序结果及多序列比对 | 第45-46页 |
| ·系统进化树的构建 | 第46-50页 |
| ·CcACTc基因和CcEF1α 基因在香樟叶片中的稳定性分析 | 第50-52页 |
| ·香樟CcCBF基因的克隆及表达分析 | 第52-59页 |
| ·CcCBF基因cDNA序列全长的获得及序列分析 | 第52-54页 |
| ·CcCBF蛋白氨基酸序列同源性及系统进化分析 | 第54-56页 |
| ·香樟CcCBF基因在低温处理下的表达模式 | 第56-57页 |
| ·香樟CcCBF基因在干旱处理下的表达模式 | 第57-59页 |
| ·香樟CcCBF基因在ABA处理下的表达模式 | 第59页 |
| ·香樟CcCBF基因表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·Cc CBFa基因表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·Cc CBFb/c/d基因表达载体的构建 | 第60页 |
| ·转香樟CcCBFb基因烟草的获得及抗逆性分析 | 第60-64页 |
| ·转香樟CcCBFb基因烟草的PCR鉴定 | 第60页 |
| ·转基因烟草半定量RT-PCR分析 | 第60-61页 |
| ·转基因烟草的抗逆性分析 | 第61-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-69页 |
| ·香樟内参基因的克隆及选择 | 第64-66页 |
| ·香樟CBF类似基因的结构特征 | 第66页 |
| ·香樟CBF类似基因的表达模式 | 第66-68页 |
| ·香樟CBF类似基因的转基因分析 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录 | 第77-80页 |
| 附录A: 缩略词（Abbreviations） | 第77-78页 |
| 附录B: 香樟CcCBF基因植物表达载体构建示意图 | 第78-79页 |
| 附录C: 攻读学位期间取得的科研成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
