| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-20页 |
| 1 植物对环境盐分胁迫的渗透调节 | 第11-12页 |
| ·盐胁迫及植物的主要耐盐机制 | 第11-12页 |
| ·渗透调节机制 | 第11-12页 |
| ·SOS途径 | 第12页 |
| ·ABA信号途径 | 第12页 |
| ·提高植物耐盐性的方法 | 第12页 |
| 2 杜氏盐藻的研究概况 | 第12-15页 |
| ·杜氏盐藻的特征 | 第12-13页 |
| ·杜氏盐藻的应用价值 | 第13页 |
| ·杜氏盐藻的盐度渗透响应过程 | 第13-14页 |
| ·杜氏盐藻耐盐机制的研究概况 | 第14-15页 |
| 3 磷脂酶C研究进展 | 第15-16页 |
| ·磷脂酶与磷脂酶C | 第15-16页 |
| ·磷脂酶C信号传导途径 | 第16页 |
| 4 酵母双杂交技术 | 第16-19页 |
| ·酵母双杂交技术的概况与原理 | 第16-17页 |
| ·酵母双杂交技术的优缺点 | 第17-18页 |
| ·酵母双杂交技术的应用 | 第18-19页 |
| ·在蛋白质组学方面的应用 | 第18页 |
| ·绘制蛋白质相互作用图谱 | 第18页 |
| ·在研究疾病机理方面的应用 | 第18-19页 |
| 5 研究目的和意义 | 第19页 |
| 6 研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章杜氏盐藻Ds PLC基因的原核表达及纯化 | 第20-38页 |
| 1 实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌种和质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·实验仪器 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-33页 |
| ·杜氏盐藻的纯化培养 | 第21-22页 |
| ·杜氏盐藻总RNA的提取 | 第22-25页 |
| ·反转录 | 第22页 |
| ·扩增Ds PLC基因c DNA全长序列 | 第22-23页 |
| ·Ds PLC基因片段的回收 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·目的基因与p MD~(TM)l8-T载体连接与转化 | 第24页 |
| ·克隆载体p MD~(TM)18-PLC质粒的小量提取 | 第24页 |
| ·克隆载体p MD~(TM)18-PLC的鉴定 | 第24-25页 |
| ·原核表达重组载体p GS-21a-Ds PLC的构建 | 第25-29页 |
| ·盐藻Ds PLC开放阅读框的PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·目的片段的回收 | 第26页 |
| ·目的基因与p MD~(TM)l9-T simple连接与转化 | 第26-27页 |
| ·重组克隆载体p MD~(TM)l9-Ds PLC的鉴定 | 第27-28页 |
| ·原核表达载体p GS-21a-Ds PLC的构建 | 第28页 |
| ·原核表达重组载体p GS-21a-Ds PLC的质粒PCR和酶切检测 | 第28-29页 |
| ·融合蛋白的原核表达 | 第29-30页 |
| ·重组表达载体转化表达菌E. coli .BL21 (DE3) | 第29页 |
| ·重组表达载体p GS21a-Ds PLC的鉴定 | 第29-30页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·小量诱导表达 | 第30页 |
| ·大量诱导表达 | 第30页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第31页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白的Western blotting检测 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-37页 |
| ·盐藻总RNA的提取及盐藻Ds PLC基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·盐藻Ds PLC基因原核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及表达形式分析 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白的纯化及Western Blotting检测 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章杜氏盐藻Ds PLC基因的亚细胞定位分析 | 第38-50页 |
| 1 实验材料 | 第38-40页 |
| ·菌种和质粒 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38-39页 |
| ·实验仪器 | 第39-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-46页 |
| ·亚细胞定位载体p MDCG-Ds PLC的构建 | 第40-44页 |
| ·目的基因的扩增 | 第41页 |
| ·目的基因的回收 | 第41-42页 |
| ·目的基因与p MD~(TM)l9-T simple连接与转化 | 第42页 |
| ·重组克隆载体p MD~(TM)l9-Ds PLC的鉴定 | 第42-43页 |
| ·亚细胞定位表达载体p MDCG-Ds PLC的构建 | 第43-44页 |
| ·重组表达载体p MDCG-Ds PLC的质粒PCR和酶切检测 | 第44页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第44页 |
| ·重组载体p MDCG-Ds PLC冻融法转化农杆菌 | 第44-45页 |
| ·农杆菌工程菌的检测 | 第45页 |
| ·农杆菌介导法侵染洋葱表皮细胞 | 第45-46页 |
| 3 实验结果 | 第46-49页 |
| ·亚细胞定位表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·重组质粒冻融法转化农杆菌的检测 | 第47-48页 |
| ·盐藻Ds PLC蛋白的亚细胞定位分析 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第四章酵母双杂交技术筛选盐藻磷脂酶C的互作蛋白 | 第50-72页 |
| 1 实验材料 | 第50-52页 |
| ·菌株和质粒 | 第50页 |
| ·实验试剂 | 第50-51页 |
| ·实验仪器 | 第51-52页 |
| 2 实验方法 | 第52-62页 |
| ·诱饵表达载体p GBKT7-Ds PLC的构建 | 第52-56页 |
| ·诱饵基因的扩增 | 第52-53页 |
| ·诱饵基因片段的回收 | 第53页 |
| ·诱饵基因与p MD~(TM) l9-T simple载体连接与转化 | 第53-54页 |
| ·重组克隆载体p MD~(TM)l9-Ds PLC的鉴定 | 第54-55页 |
| ·酵母双杂交表达载体p GBKT7-Ds PLC的构建 | 第55页 |
| ·酵母双杂交表达载体p GBKT7-Ds PLC的质粒PCR和酶切检测 | 第55-56页 |
| ·酵母菌感受态细胞的制备 | 第56页 |
| ·诱饵表达质粒p GBKT7-Ds PLC转化酵母感受态细胞 | 第56-57页 |
| ·菌落PCR法鉴定阳性克隆 | 第57-58页 |
| ·诱饵蛋白的毒性检测 | 第58页 |
| ·诱饵蛋白的自激活性检测 | 第58-59页 |
| ·酵母双杂交 | 第59-62页 |
| ·阳性克隆酵母质粒的提取 | 第59-60页 |
| ·酵母菌阳性克隆质粒的PCR检测 | 第60-61页 |
| ·阳性克隆质粒的转化及扩增 | 第61-62页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定及测序 | 第62页 |
| ·生物信息学分析 | 第62页 |
| 3 实验结果 | 第62-71页 |
| ·盐藻Ds PLC基因的克隆及p GBKT7-Ds PLC表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·诱饵表达质粒热激法转化酵母菌Y2H Gold的检测结果 | 第63-64页 |
| ·诱饵蛋白的毒性及自激活检测结果 | 第64-65页 |
| ·酵母双杂交及阳性克隆的筛选 | 第65-66页 |
| ·阳性克隆酵母质粒的提取及PCR检测 | 第66-67页 |
| ·阳性克隆大肠杆菌菌落PCR检测 | 第67-69页 |
| ·互作蛋白的生物信息学分析 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 结论与展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附录 | 第82-85页 |
