| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一部分 文献研究 | 第15-27页 |
| 1. 上皮间质转化 | 第15-16页 |
| 2. 上皮间质转化与肿瘤的转移 | 第16页 |
| 3. 上皮细胞间质转化发生的机制 | 第16-22页 |
| ·钙粘蛋白 | 第16-17页 |
| ·波形蛋白 | 第17页 |
| ·纤维连接蛋白 | 第17-18页 |
| ·EMT在转录水平的调控 | 第18-20页 |
| ·EMT相关蛋白信号传导通路 | 第20-22页 |
| 4. 肿瘤微环境与EMT | 第22-23页 |
| 5. GRP78与EMT的关系 | 第23-24页 |
| ·GRP78的结构与功能 | 第23-24页 |
| ·GRP78与肿瘤转移 | 第24页 |
| 6. 中医药与EMT | 第24-27页 |
| 第二部分 细胞实验研究 | 第27-61页 |
| 1. 实验材料 | 第27-30页 |
| ·实验细胞 | 第27页 |
| ·实验药物 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-29页 |
| ·实验仪器 | 第29-30页 |
| ·主要试剂配制 | 第30页 |
| 2. 实验方法 | 第30-43页 |
| ·益气除痰方汤剂制备 | 第30页 |
| ·细胞复苏 | 第30页 |
| ·细胞培养 | 第30页 |
| ·细胞传代 | 第30-31页 |
| ·细胞缺氧模型的构建 | 第31页 |
| ·细胞冻存 | 第31页 |
| ·细胞计数 | 第31页 |
| ·Annexin V/PI法流式检测益气除痰方对A549细胞凋亡的影响 | 第31-32页 |
| ·缺氧及益气除痰方干预对A549细胞形态的影响 | 第32页 |
| ·实时荧光定量PCR检测A549细胞EMT相关转录基因表达 | 第32-34页 |
| ·Western blot检测EMT标记物及相关信号蛋白表达 | 第34-37页 |
| ·细胞免疫荧光检测GRP78表达情况 | 第37页 |
| ·GRP78质粒的构建 | 第37-40页 |
| ·质粒转染后A549细胞筛选抗生素剂量的确定 | 第40-41页 |
| ·GRP78质粒的瞬时转染 | 第41页 |
| ·质粒转染稳定细胞株的筛选 | 第41-42页 |
| ·蛋白抑制剂法探究各信号蛋白EMT过程中的作用 | 第42-43页 |
| 3. 统计学分析 | 第43-44页 |
| 4. 结果 | 第44-57页 |
| ·Annexin V/PI法流式检测益气除痰方对A549细胞凋亡的影响 | 第44-45页 |
| ·缺氧培养及益气除痰方干预对A549细胞形态的影响 | 第45页 |
| ·缺氧及益气除痰方干预对EMT相关转录因子的影响 | 第45-47页 |
| ·缺氧及益气除痰方干预下EMT相关蛋白表达的变化 | 第47-49页 |
| ·细胞免疫荧光检测缺氧及益气除痰方干预对GRP78蛋白表达的影响 | 第49-50页 |
| ·GRP78质粒转染A549细胞的构建结果 | 第50-52页 |
| ·各特异性蛋白抑制对缺氧环境下EMT相关蛋白表达的影响 | 第52-56页 |
| ·各特异性蛋白抑制对缺氧环境下EMT相关转录因子的影响 | 第56-57页 |
| 5. 讨论 | 第57-61页 |
| 第三部分 动物实验研究 | 第61-73页 |
| 1. 实验材料 | 第61-63页 |
| ·实验细胞 | 第61页 |
| ·实验动物 | 第61页 |
| ·实验药物 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·实验仪器 | 第62-63页 |
| 2. 实验方法 | 第63-65页 |
| ·细胞培养 | 第63页 |
| ·构建裸鼠A549肺癌移植瘤模型 | 第63页 |
| ·益气除痰方汤剂制备 | 第63页 |
| ·动物分组 | 第63页 |
| ·动物给药及处理 | 第63页 |
| ·观察小鼠一般情况 | 第63-64页 |
| ·观察测量肿瘤瘤体体积 | 第64页 |
| ·测量瘤体重量,计算肿瘤抑制率 | 第64页 |
| ·观察计数肺转移结节个数 | 第64页 |
| ·免疫组化检测瘤体组织EMT相关各蛋白表达 | 第64-65页 |
| 3. 统计学处理 | 第65页 |
| 4. 结果 | 第65-71页 |
| ·裸鼠A549移植瘤模型给药后一般状态观察 | 第65页 |
| ·益气除痰方对A549移植瘤模型小鼠体重的影响 | 第65-66页 |
| ·益气除痰方对A549移植瘤瘤体体积的影响 | 第66页 |
| ·益气除痰方对裸鼠A549移植瘤模型瘤重的影响 | 第66-67页 |
| ·益气除痰方对裸鼠A549移植瘤模型肺转移结节的影响 | 第67页 |
| ·益气除痰方对EMT标记物及相关信号蛋白表达的影响 | 第67-71页 |
| 5. 讨论 | 第71-73页 |
| 结语 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 在校期间发表论文情况 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 附件 | 第8页 |
