| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 绪论 | 第8-14页 |
| ·肌肉生长抑制素的相关研究 | 第8-9页 |
| ·肌肉生长抑制素基因和蛋白结构 | 第8-9页 |
| ·研究MSTN的意义 | 第9页 |
| ·RNA干涉 | 第9-11页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第9-10页 |
| ·siRNA设计原则 | 第10页 |
| ·siRNA与shRNA的特点 | 第10-11页 |
| ·RNAi的应用 | 第11页 |
| ·特异性启动子 | 第11-12页 |
| ·启动子 | 第11-12页 |
| ·SP启动子 | 第12页 |
| ·成纤维细胞 | 第12-13页 |
| ·成纤维细胞特点 | 第12页 |
| ·成纤维细胞的应用 | 第12-13页 |
| ·研究目的及意义 | 第13-14页 |
| 2 小鼠MSTN基因RNA干涉载体筛选 | 第14-30页 |
| ·实验材料 | 第14-16页 |
| ·实验动物、细胞及菌株 | 第14页 |
| ·载体信息 | 第14-15页 |
| ·主要药品和试剂 | 第15页 |
| ·常用溶液的配制 | 第15-16页 |
| ·仪器设备 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-23页 |
| ·小鼠Myostatin基因的克隆与序列分析 | 第16-19页 |
| ·小鼠Myostatin基因真核表达载体的构建 | 第19页 |
| ·小鼠Myostatin基因shRNA设计与合成 | 第19-20页 |
| ·小鼠Myostatin基因RNA干涉载体的构建 | 第20-21页 |
| ·293GP细胞的复苏培养与传代 | 第21页 |
| ·RNA干涉载体的构效率检测 | 第21-23页 |
| ·实验结果 | 第23-27页 |
| ·小鼠Myostatin基因的克隆与序列分析 | 第23-24页 |
| ·小鼠Myostatin基因真核表达载体的构建 | 第24页 |
| ·小鼠Myostatin基因RNA干涉载体的测序 | 第24-25页 |
| ·293GP细胞复苏传代与转染 | 第25页 |
| ·RNA干涉效率结果与分析 | 第25-27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| ·本章小结 | 第29-30页 |
| 3 转RNA干涉MSTN基因小鼠成纤维细胞株的建立 | 第30-38页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| ·主要药品和试剂 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·骨骼肌特异启动子RNA干涉载体的构建与检测 | 第30-31页 |
| ·小鼠皮肤成纤维细胞的原代培养 | 第31-32页 |
| ·G418浓度的筛选 | 第32页 |
| ·小鼠皮肤成纤维细胞的转染及筛选 | 第32页 |
| ·转基因细胞系的鉴定 | 第32-33页 |
| ·实验结果 | 第33-37页 |
| ·骨骼肌特异性RNA干涉MSTN基因载体的构建 | 第33页 |
| ·小鼠皮肤成纤维细胞的原代培养及形态 | 第33-34页 |
| ·筛选转基因阳性细胞的最适G418浓度 | 第34-35页 |
| ·转基因细胞的生物学特征 | 第35-36页 |
| ·转基因阳性细胞的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 4 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| 附录 | 第44-47页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |