| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 1 引言 | 第13-15页 |
| 2 p70S6K1特异性shRNA表达载体的构建 | 第15-26页 |
| ·材料 | 第15-19页 |
| ·仪器与设备 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·常用培养基及液体试剂的配置 | 第16页 |
| ·载体及菌株 | 第16-17页 |
| ·RNA干扰靶序列 | 第17-18页 |
| ·shRNA表达片段 | 第18-19页 |
| ·重组质粒的构建 | 第19-23页 |
| ·质粒酶切 | 第19页 |
| ·酶切产物胶回收及纯化 | 第19-20页 |
| ·载体的连接 | 第20页 |
| ·质粒的转化 | 第20-21页 |
| ·测序鉴定 | 第21页 |
| ·重组质粒的提取及浓度测定 | 第21-23页 |
| ·结果 | 第23页 |
| ·测序鉴定 | 第23页 |
| ·质粒浓度及纯度 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-25页 |
| ·小结 | 第25-26页 |
| 3 plshRNA-p70S6K1在EC9706细胞中功能初步分析 | 第26-43页 |
| ·材料 | 第26-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第27-28页 |
| ·细胞株和载体 | 第28页 |
| ·引物序列 | 第28页 |
| ·常用培养基及液体试剂的配置 | 第28-30页 |
| ·方法 | 第30-37页 |
| ·细胞培养 | 第30页 |
| ·shRNA表达载体转染EC9706细胞 | 第30页 |
| ·荧光显微镜下观察 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR实验方法 | 第31-33页 |
| ·Western blotting实验方法 | 第33-37页 |
| ·统计学处理方法 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-40页 |
| ·转染细胞荧光表达 | 第37-38页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第38页 |
| ·RT-PCR结果 | 第38-39页 |
| ·Western blotting结果 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| 4 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 综述 mTOR信号通路在抗肿瘤化疗耐药中的作用 | 第47-66页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录A shRNA表达片段的测序结果图 | 第66-69页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |