| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 主要符号中英文对照表 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-21页 |
| 1 神经干细胞及其在神经系统中的作用 | 第15-16页 |
| 2 NSC 可以在体外培养增殖 | 第16页 |
| 3 影响 NSC 分化的因素 | 第16-19页 |
| ·神经营养因子对 NSC 分化的影响 | 第16-17页 |
| ·MAPK/ERK 信号通路对 NSC 分化的影响 | 第17-18页 |
| ·转录因子对 NSC 分化的影响 | 第18-19页 |
| 4 NSC 在神经退行性疾病中的应用前景 | 第19-20页 |
| 5 本研究的立题依据和创新点 | 第20-21页 |
| 第一部分 胚胎大鼠神经干细胞的体外培养 | 第21-33页 |
| 1 材料和方法 | 第21-27页 |
| ·动物、主要试剂和仪器 | 第21-23页 |
| ·NSC 的取材、培养和传代 | 第23页 |
| ·NSC 的分化 | 第23-24页 |
| ·NSC 的干性鉴定和分化能力鉴定 | 第24页 |
| ·免疫细胞化学/免疫荧光 | 第24-25页 |
| ·Q-PCR 步骤 | 第25-27页 |
| ·RNA 的提取 | 第25页 |
| ·逆转录合成 cDNA 第一链 | 第25-26页 |
| ·Q-PCR 反应检测基因表达 | 第26-27页 |
| ·统计学分析 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-30页 |
| ·NSC 的培养和增殖及干性签定 | 第27-28页 |
| ·NSC 的分化能力鉴定 | 第28-30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| ·NSC 的体外培养方案 | 第30页 |
| ·影响 NSC 分化的因素 | 第30-31页 |
| ·NSC 体外培养的不足 | 第31页 |
| ·神经球转化为单层贴壁培养的优点 | 第31-32页 |
| 4. 结论 | 第32-33页 |
| 第二部分 NGF 联合 BDNF 对体外培养的神经干细胞分化为神经元的影响 | 第33-56页 |
| 1 材料和方法 | 第33-41页 |
| ·动物、主要试剂和仪器 | 第33-35页 |
| ·NSC 的取材和培养 | 第35页 |
| ·单独使用 NGF 或 BDNF 和两个因子的联合应用 | 第35-36页 |
| ·NGF 和 BDNF 浓度的确定 | 第35页 |
| ·因子的单独使用和联合应用对 NSC 分化及相关分子改变的影响 | 第35-36页 |
| ·免疫细胞化学/免疫荧光 | 第36页 |
| ·Q-PCR 步骤 | 第36-37页 |
| ·总蛋白的提取和浓度测定 | 第37-38页 |
| ·细胞裂解提取总蛋白 | 第37页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第37-38页 |
| ·蛋白免疫印迹 | 第38-41页 |
| ·WB 试剂准备 | 第38-39页 |
| ·WB 分离胶和浓缩胶的制备 | 第39-40页 |
| ·WB 操作步骤 | 第40-41页 |
| ·统计学分析 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-52页 |
| ·NGF 和 BDNF 诱导单层贴壁培养 NSC 分化 | 第41-43页 |
| ·比较因子的单独使用和联合应用对 NSC 分化的影响 | 第43-47页 |
| ·WB 检测 PD98059 对 P-ERK 的水平变化和神经元分化比例的影响 | 第47-49页 |
| ·Q-PCR 检测 NGF 或(和)BDNF 对 bHLH 家庭基因的表达变化的影响 | 第49-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| ·NGF 和 BDNF 对 NSC 分化为神经元的叠加作用 | 第52-53页 |
| ·ERK 的磷酸化参与 NGF 和 BDNF 对 NSC 的叠加作用 | 第53页 |
| ·MASH1、NGN1 和 NeuroD 的表达变化参与 NGF 和 BDNF 对 NSC 的叠加作用 | 第53-54页 |
| ·NSC 在细胞移植中的前景和挑战 | 第54页 |
| 4. 结论 | 第54-56页 |
| 第三部分 NGF和BDNF联合神经干细胞在192-IgG-saporin致阿尔茨海默病模型鼠中的应用 | 第56-73页 |
| 1 材料和方法 | 第56-62页 |
| ·动物、主要试剂和仪器 | 第56-57页 |
| ·SD 大鼠侧脑室的 192-IgG-saporin 注射 | 第57-58页 |
| ·水迷宫行为学测试 | 第58-59页 |
| ·Morris 水迷宫实验装置 | 第58页 |
| ·定位航行实验(隐藏平台实验) | 第58-59页 |
| ·空间搜索实验 | 第59页 |
| ·NSC 的培养，诱导分化和移植 | 第59页 |
| ·动物的灌注及组织切片 | 第59-60页 |
| ·形态学检测 | 第60-62页 |
| ·免疫组织化学检测 p75NGFR受体和突触素 | 第60页 |
| ·海马切片 AChE 纤维染色 | 第60-61页 |
| ·切片脱水透明 | 第61-62页 |
| ·统计学分析 | 第62页 |
| 2 结果 | 第62-70页 |
| ·Morris 水迷宫比较不同组之间的行为学差异 | 第62-64页 |
| ·胆碱能神经元在不同组间的差别 | 第64-66页 |
| ·突触素染色在不同组间的差别 | 第66-68页 |
| ·AChE 染色在不同组间的差别 | 第68-70页 |
| 3. 讨论 | 第70-72页 |
| ·192-IgG-saporin 致 AD 模型的建立 | 第70页 |
| ·NSC 对 AD 模型鼠的影响 | 第70-71页 |
| ·NGF 和 BDNF 联合 NSC 对 AD 模型鼠的影响 | 第71-72页 |
| 4 结论 | 第72-73页 |
| 全文总结和展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 综述 | 第84-91页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 作者简介 | 第91-94页 |
| 附录 | 第94-95页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
