| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-30页 |
| 第一节 白念珠菌的生物学特性及致病性 | 第13-14页 |
| 第二节 钙信号系统与钙稳态的调控 | 第14-22页 |
| ·细胞钙分布 | 第14-15页 |
| ·细胞内钙离子浓度的调控 | 第15-18页 |
| ·钙离子信号转导途径 | 第18-22页 |
| 第三节 真核细胞中,氧化压力应答调控机制 | 第22-25页 |
| ·压力激活蛋白激酶(SAPKs)概述 | 第22-24页 |
| ·Yap1介导的氧化压力应答 | 第24页 |
| ·硫氧还蛋白介导的氧化压力应答 | 第24-25页 |
| 第四节 钙离子信号途径参与氧化压力应答的研究现状 | 第25-27页 |
| ·酿酒酵母中CCS途径介导的氧化压力应答 | 第25-26页 |
| ·白念珠菌中,Ca~(2+)信号途径参与的氧化压力应答 | 第26-27页 |
| 第五节 选题依据及研究内容 | 第27-30页 |
| ·选题依据 | 第27-29页 |
| ·研究技术路线 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-51页 |
| 第一节 实验材料 | 第30-39页 |
| ·实验菌株 | 第30-32页 |
| ·质粒 | 第32页 |
| ·引物 | 第32-34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要溶液 | 第35-37页 |
| ·培养基 | 第37-39页 |
| 第二节 实验方法 | 第39-51页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2转化法 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌电转化法 | 第40页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取(碱裂解法) | 第40页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的测定 | 第40-41页 |
| ·胞质钙离子浓度检测 | 第41页 |
| ·PCR反应体系 | 第41-42页 |
| ·酶切反应体系 | 第42-43页 |
| ·DNA连接体系 | 第43页 |
| ·DNA片段的纯化回收 | 第43页 |
| ·倍比梯度稀释法 | 第43-44页 |
| ·白念珠菌醋酸锂转化法 | 第44页 |
| ·白念珠菌及酿酒酵母基因组的提取 | 第44-45页 |
| ·白念珠菌总蛋白的提取 | 第45页 |
| ·Western blotting | 第45-46页 |
| ·白念珠菌RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·RNA样品中DNA的消化 | 第47页 |
| ·RNA反转录 | 第47-49页 |
| ·实时定量PCR(RT-PCR) | 第49页 |
| ·实时定量PCR结果分析方法 | 第49-50页 |
| ·液体及固体菌丝发育诱导 | 第50页 |
| ·白念珠菌毒力分析 | 第50-51页 |
| 第三章 结果与分析 | 第51-80页 |
| 第一节 白念珠菌ECM7基因的敲除和功能分析 | 第51-69页 |
| ·白念珠菌ECM7基因的鉴定 | 第51页 |
| ·白念珠菌ECM7基因的敲除 | 第51-53页 |
| ·白念珠菌ECM7基因回补菌株的构建 | 第53-54页 |
| ·ECM7基因的缺失对菌体在低钙条件下生长情况的影响 | 第54-55页 |
| ·ECM7基因的缺失对碱性刺激下胞外钙离子内流的影响 | 第55-56页 |
| ·Ecmm7的稳定性受到Cch1和Mid1的调控 | 第56-57页 |
| ·ECM7基因的缺失对白念珠菌氧化压力应答方面的影响 | 第57-59页 |
| ·ECM7基因的缺失导致菌体内ROS含量升高 | 第59-60页 |
| ·ECM7影响白念珠菌中参与氧化压力应答基因的表达 | 第60-65页 |
| ·ECM7影响白念珠菌Cap1的稳定性 | 第65-66页 |
| ·ECM7基因的缺失对菌丝发育的影响 | 第66-67页 |
| ·ECM7基因的缺失对白念珠菌毒力的影响 | 第67-69页 |
| 第二节 CaMK基因的敲除及功能分析 | 第69-80页 |
| ·白念珠菌CaMK基因的敲除 | 第70-72页 |
| ·白念珠菌CMK1,CMK2基因回补菌株的构建 | 第72-73页 |
| ·CaMK基因缺失之后对菌体生长情况的影响 | 第73-74页 |
| ·CaMK基因缺失之后对菌体细胞壁完整性的影响 | 第74-75页 |
| ·CaMK基因缺失之后对菌体细胞壁完整性(CWI)的激活 | 第75-76页 |
| ·CaMK基因缺失之后对菌体应对外界氧化压力应答的影响 | 第76-78页 |
| ·CaMK基因缺失之后对菌体线粒体膜电势变化的影响 | 第78-79页 |
| ·CaMK基因缺失之后对菌体内氧化压力应答基因表达的影响 | 第79-80页 |
| 第四章 讨论 | 第80-84页 |
| 第一节 Ecm7在白念珠菌功能方面的分析讨论 | 第80-82页 |
| ·Ecm7影响菌体胞浆内钙离子稳态的维持 | 第80-81页 |
| ·Ecm7参与菌体氧化压力应答的调控 | 第81页 |
| ·Ecm7对菌体菌丝发育及致病性的影响 | 第81-82页 |
| 第二节 CaMKs在白念珠菌功能方面的分析讨论 | 第82-84页 |
| ·CaMK基因对白念珠菌细胞壁完整性的影响 | 第82-83页 |
| ·CaMK基因对白念珠菌氧化压力应答方面的影响 | 第83-84页 |
| 第五章 结论与展望 | 第84-87页 |
| 第一节 结论 | 第84-85页 |
| 第二节 论文主要特色与创新点 | 第85-86页 |
| 第三节 相关工作的前景展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第96-97页 |
