| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 縮略词表 | 第8-14页 |
| 1 绪论 | 第14-43页 |
| ·背景意义 | 第14-15页 |
| ·国内外进展 | 第15-41页 |
| ·肿瘤概述 | 第15-17页 |
| ·肿瘤与免疫 | 第17-20页 |
| ·抗肿瘤药物研究进展 | 第20-24页 |
| ·抗肿瘤靶向药物及作用靶点选择研究进展 | 第24-29页 |
| ·细胞对温度变化的耐受性及应用 | 第29-34页 |
| ·小分子抗体研究进展 | 第34-36页 |
| ·超抗原与金黄色葡萄球菌肠毒素 | 第36-38页 |
| ·核糖体展示技术研究进展 | 第38-41页 |
| ·论文选题依据及研究内容 | 第41-43页 |
| ·选题依据 | 第41页 |
| ·研究内容 | 第41-43页 |
| 2 热诱导后Hep G2细胞膜表面蛋白水平的动态研究 | 第43-53页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·细胞系 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43-44页 |
| ·溶液配制 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·细胞培养 | 第45页 |
| ·热诱导Hep G2细胞膜表面蛋白水平酶联免疫吸附技术检测 | 第45页 |
| ·热诱导Hep G2细胞膜表面蛋白水平免疫细胞化学检测 | 第45-46页 |
| ·热诱导Hep G2细胞膜表面蛋白水平免疫荧光技术检测 | 第46-47页 |
| ·热诱导Hep G2细胞膜表面蛋白水平流式细胞术检测 | 第47页 |
| ·统计分析 | 第47页 |
| ·实验结果 | 第47-50页 |
| ·热诱导后Hep G2细胞膜表面蛋白水平酶联免疫吸附技术检测结果 | 第47-48页 |
| ·热诱导后Hep G2细胞膜表面蛋白水平免疫细胞化学检测结果 | 第48-49页 |
| ·热诱导后Hep G2细胞膜表面蛋白水平免疫荧光技术检测结果 | 第49页 |
| ·热诱导后Hep G2细胞膜表面蛋白水平流式细胞术检测结果 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 3 单链抗体文库的构建 | 第53-66页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料 | 第53-55页 |
| ·细胞系 | 第53页 |
| ·质粒与菌株 | 第53页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·溶液配制 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-62页 |
| ·细胞培养 | 第55页 |
| ·细胞热诱导及动物免疫 | 第55-56页 |
| ·小鼠淋巴细胞提取 | 第56页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞总RNA提取 | 第56页 |
| ·反转录成cDNA | 第56-57页 |
| ·PCR扩增鼠V_H、V_L片段及scFv基因组装 | 第57-60页 |
| ·ScFv文库的构建及鉴定 | 第60-62页 |
| ·实验结果 | 第62-64页 |
| ·动物免疫及血清效价测定 | 第62页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞总RNA提取及反转录cDNA | 第62-63页 |
| ·PCR扩增鼠V_H、V_L片段及scFv基因组装结果 | 第63页 |
| ·ScFv文库的构建及鉴定结果 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 4 核糖体展示技术筛选特异性单链抗体克隆 | 第66-88页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·实验材料 | 第66-70页 |
| ·细胞系 | 第66页 |
| ·质粒与菌株 | 第66页 |
| ·引物合成 | 第66-67页 |
| ·试剂 | 第67页 |
| ·溶液的配制 | 第67-70页 |
| ·实验方法 | 第70-80页 |
| ·V_H/k文库的构建 | 第70-73页 |
| ·核糖体展示及免疫亲和筛选 | 第73-75页 |
| ·特异性scFv基因克隆 | 第75-76页 |
| ·序列测定与分析 | 第76页 |
| ·特异性scFv基因表达及表达产物纯化 | 第76-78页 |
| ·特异性scFv基因表达产物初步鉴定 | 第78-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-86页 |
| ·V_H/k文库的构建及亲和筛选结果 | 第80-81页 |
| ·序列分析 | 第81-82页 |
| ·特异性scFv基因表达及表达产物纯化结果 | 第82页 |
| ·特异性scFv基因表达产物性质初步鉴定结果 | 第82-86页 |
| ·讨论 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 5 特异性单链抗体重组免疫毒素的构建及鉴定 | 第88-114页 |
| ·引言 | 第88页 |
| ·实验材料 | 第88-89页 |
| ·细胞系 | 第88页 |
| ·质粒与菌株 | 第88页 |
| ·引物合成 | 第88-89页 |
| ·试剂 | 第89页 |
| ·溶液的配制 | 第89页 |
| ·实验方法 | 第89-98页 |
| ·金黄色葡萄球菌肠毒素B基因克隆 | 第89-92页 |
| ·融合蛋白基因初步生物信息学预测 | 第92页 |
| ·融合蛋白基因(scfv5669-seb)质粒构建及鉴定 | 第92-95页 |
| ·融合蛋白基因(scfv5669-seb)表达及产物纯化 | 第95-96页 |
| ·融合蛋白基因(scfv5669-seb)表达产物鉴定 | 第96-97页 |
| ·MTT法测定scfv5669-seb融合蛋白体外抗肿瘤作用效果 | 第97页 |
| ·统计分析 | 第97-98页 |
| ·实验结果 | 第98-112页 |
| ·金黄色葡萄球菌肠毒素B基因克隆结果 | 第98-100页 |
| ·融合蛋白基因初步生物信息学预测结果 | 第100-102页 |
| ·融合蛋白基因(scfv5669-seb)质粒构建及鉴定结果 | 第102-109页 |
| ·融合蛋白基因(scfv5669-seb)表达及产物纯化结果 | 第109-110页 |
| ·融合蛋白基因(scfv5669-seb)表达产物鉴定结果 | 第110-111页 |
| ·MTT法测定scfv5669-seb融合蛋白体外抗肿瘤作用结果 | 第111-112页 |
| ·讨论 | 第112-113页 |
| ·小结 | 第113-114页 |
| 结论与展望 | 第114-116页 |
| 结论 | 第114页 |
| 展望 | 第114-116页 |
| 创新点摘要 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-126页 |
| 附录A 主要仪器及设备 | 第126-128页 |
| 附录B 序列测定与分析 | 第128-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 作者简介 | 第134-135页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第135-136页 |
