| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-14页 |
| 1. 胶质瘤是预后极差的颅内常见恶性肿瘤 | 第9页 |
| 2. 胶质瘤的基因治疗 | 第9-13页 |
| ·胶质瘤基因治疗的概况 | 第9页 |
| ·胶质瘤病毒载体研究 | 第9-10页 |
| ·胶质瘤特异性启动子的研究现状 | 第10-11页 |
| ·低氧诱导元件(HRE)及其优化序列(optHBS) | 第11-12页 |
| ·BAXα基因 | 第12-13页 |
| 3. 本研究探讨能否构建高效胶质瘤特异性杂合启动子并将其初步用于胶质瘤基因治疗 | 第13-14页 |
| 实验材料 | 第14-22页 |
| 1. 大肠杆菌菌种和细胞株 | 第14页 |
| 2. 质粒 | 第14页 |
| 3. 限制性内切酶及其它修饰酶类 | 第14-15页 |
| 4. 转染试剂 | 第15页 |
| 5.抗体 | 第15页 |
| 6. 其它主要试剂及试剂盒 | 第15页 |
| 7. 主要仪器 | 第15-16页 |
| 8. 生物信息学软件和数据库 | 第16页 |
| 9. 引物和基因 | 第16-22页 |
| 实验方法 | 第22-35页 |
| 1. 基本技术路线 | 第22页 |
| 2. 基本实验方法 | 第22-34页 |
| ·质粒构建 | 第22-27页 |
| ·人基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·PCR反应 | 第23页 |
| ·酶切反应 | 第23页 |
| ·DNA片段回收 | 第23-24页 |
| ·连接反应 | 第24页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5-α制备 | 第24-25页 |
| ·质粒的转化 | 第25页 |
| ·pGEM-T EASY克隆基因 | 第25页 |
| ·质粒小量提取 | 第25-26页 |
| ·质粒中量提取 | 第26-27页 |
| ·细胞培养 | 第27-28页 |
| ·细胞的生长条件 | 第27页 |
| ·细胞的传代 | 第27页 |
| ·细胞的复苏及冻存 | 第27-28页 |
| ·脂质体转染质粒DNA | 第28页 |
| ·双荧光素酶报告系统测定启动子活性 | 第28-29页 |
| ·Western Blot | 第29-32页 |
| ·细胞及组织总蛋白提取 | 第29页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第29-30页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第30页 |
| ·抗原抗体反应 | 第30-31页 |
| ·辣根过氧化物酶化学发光法检测蛋白(ECL反应) | 第31页 |
| ·溶液配制 | 第31-32页 |
| ·TUNEL染色 | 第32-33页 |
| ·PI染色流式细胞仪细胞计数 | 第33-34页 |
| 3. 统计学分析 | 第34-35页 |
| 实验结果 | 第35-50页 |
| 1. 克隆P/Msi1活性序列 | 第35-40页 |
| ·利用生物信息学技术推测P/Msi1可能活性序列 | 第35页 |
| ·构建M1/M2/M3/M4荧光素酶报告质粒成功 | 第35-36页 |
| ·细胞培养及转染效率评估 | 第36-38页 |
| ·M1片段为P/Msi1的活性片段 | 第38-40页 |
| 2. P/GFAP与P/Msi1启动子功能比较 | 第40-41页 |
| ·构建P/GFAP荧光素酶报告质粒成功 | 第40页 |
| ·在各细胞系中比较P/GFAP与P/Msi1启动子功能 | 第40-41页 |
| 3. 检测4optHBS-Msi1,4optHBS-GFAP,4HRE-GFAP杂合启动子对低氧的反应性 | 第41-43页 |
| ·构建4optHBS-Msi1-pGL3-basic,4optHBS-GFAP-pGL3-basic质粒成功 | 第41-42页 |
| ·荧光测定检测对低氧环境反应性 | 第42-43页 |
| 4. 检测体外4optHBS-Msi1-Baxα、4optHBS-GFAP-Baxα、4HRE-GFAP-Baxα胶质瘤基因治疗疗效 | 第43-50页 |
| ·4optHBS-Msi1-Baxα、4optHBS-GFAP-Baxα、4HRE-GFAP-Baxα治疗载体构建成功 | 第43-45页 |
| ·4optHBS-Msi1-Baxα、4optHBS-GFAP-Baxα、4HRE-GFAP-Baxα诱导胶质瘤细胞内过表达Bax蛋白及细胞凋亡 | 第45-50页 |
| 讨论 | 第50-56页 |
| 1. 构建脑胶质瘤细胞特异性启动子的意义 | 第50-51页 |
| 2. GFAP启动子 | 第51页 |
| 3. Musashi1启动子及本课题该启动子的成功克隆 | 第51-52页 |
| 4. P/GFAP与P/Musashi1启动子活性比较 | 第52页 |
| 5. 4optHBS-Msi1,4optHBS-GFAP,4HRE-GFAP启动子对低氧敏感 | 第52-53页 |
| 6. 4optHBS-Msi1-Baxα,4optHBS-GFAP-Baxα,4HRE-GFAP-Baxa诱导胶质瘤细胞凋亡的初步应用 | 第53-54页 |
| 7. 本实验存在不足之处及今后实验设想 | 第54-56页 |
| 小结 | 第56-57页 |
| 综述 | 第57-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 英文缩写 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 个人简历 | 第68页 |
