| 前言 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 英文缩写词表 | 第13-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-27页 |
| ·细胞凋亡和 p53 缺陷 | 第15页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶、组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其作用机制 | 第15-19页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶抑制剂和死亡受体 5 | 第19-21页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶抑制剂和内质网应激 | 第21-23页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶抑制剂和 ATF3 | 第23-27页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第27-41页 |
| ·实验材料 | 第27-32页 |
| ·细胞系及培养条件 | 第27页 |
| ·主要试剂及来源 | 第27-29页 |
| ·质粒和载体 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·常用试剂的配制 | 第30-32页 |
| ·实验方法 | 第32-39页 |
| ·细胞培养和冻存 | 第32页 |
| ·免疫印迹检测 | 第32-33页 |
| ·ATF3 和 ATF4 敲低细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·总 RNA 提取 | 第34-35页 |
| ·逆转录合成 cDNA 及半定量 RT-PCR 检测 ATF3、DR5、CHOP 及 ATF4 mRNA 水平 | 第35-36页 |
| ·细胞表面 DR5 的检测 | 第36-37页 |
| ·荧光素酶报告基因分析实验（Luciferase Reporter Assay） | 第37-38页 |
| ·台盼兰染色 | 第38页 |
| ·MTT 实验 | 第38页 |
| ·DAPI 染色 | 第38-39页 |
| ·数据的获取及分析 | 第39-41页 |
| ·数据的获取 | 第39页 |
| ·统计分析 | 第39-41页 |
| 第3章 实验结果 | 第41-61页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶抑制剂能够引起 p53 缺陷的人结肠癌细胞发生内质网应激并增加细胞内 ATF4、ATF3、CHOP 和 DR5 的表达 | 第41-45页 |
| ·在 p53 突变的人结肠癌细胞中 SAHA 能增加内质网应激标志物和其下游基因 ATF4、ATF3、CHOP 和 DR5 蛋白的表达 | 第41-42页 |
| ·SAHA 增加内质网应激标志物和其下游基因 ATF4、ATF3、CHOP 和 DR5 的表达的程度与药物浓度相关 | 第42页 |
| ·SAHA 能不同程度地增加人结肠癌细胞表面 DR5 的表达 | 第42-43页 |
| ·SAHA 能增加 ATF4、ATF3、CHOP 和 DR5 mRNA 的表达为了进一步验证 SAHA 的作用，我们使用了 qRT-PCR 的方法，检测 SAHA 刺激后人结肠癌 HCT116 p53 null 中 ATF4、ATF3、 CHOP 和 DR5 mRNA 的表达情况，结果显示（如图 3.4）：SAHA能增加细胞中 ATF4、ATF3、CHOP 和 DR5 | 第43-44页 |
| ·不同的组蛋白去乙酰化酶抑制剂都能增加内质网应激标志物和其下游基因 ATF4、ATF3、CHOP 和 DR5 蛋白的表达 | 第44页 |
| ·不同的组蛋白去乙酰化酶抑制剂都能增加人结肠癌细胞表面DR5 的表达 | 第44-45页 |
| ·ATF3 敲低抑制 HDACIs 诱导人结肠癌细胞中 DR5 表达的上调 | 第45-47页 |
| ·ATF3 敲低抑制 SAHA 诱导人结肠癌细胞中 DR5 蛋白的表达 | 第45-46页 |
| ·ATF3 敲低抑制 SAHA 诱导人结肠癌细胞中 DR5 mRNA 的表达 | 第46-47页 |
| ·ATF3 敲低抑制 HDACIs 诱导人结肠癌细胞中 DR5 蛋白的表达 | 第47页 |
| ·在 ATF3 缺陷的小鼠胚胎成纤维细胞中 HDACIs 诱导 DR5 表达的能力也受到抑制 | 第47-50页 |
| ·在 ATF3 缺陷的小鼠胚胎成纤维细胞中 SAHA 诱导 DR5 蛋白表达的能力受到抑制 | 第47-48页 |
| ·在 ATF3 缺陷的小鼠胚胎成纤维细胞中 SAHA 诱导 DR5 mRNA表达的能力受到抑制 | 第48-49页 |
| ·当 ATF3 被重新导入细胞后，SAHA 诱导 DR5 蛋白表达的能力得到回复 | 第49页 |
| ·在 ATF3 缺陷的小鼠胚胎成纤维细胞中 HDACIs 诱导 DR5 蛋白表达的能力受到抑制 | 第49-50页 |
| ·ATF4 敲低抑制 HDACIs 诱导人结肠癌细胞中 ATF3、CHOP 和 DR5表达的上调 | 第50-52页 |
| ·ATF4 敲低抑制 SAHA 诱导人结肠癌细胞中 ATF3、CHOP 和 DR5蛋白的表达 | 第50页 |
| ·ATF4 敲低抑制 SAHA 诱导人结肠癌细胞中 ATF3、CHOP 和 DR5mRNA 的表达 | 第50-51页 |
| ·ATF4 敲低抑制 HDACIs 诱导人结肠癌细胞中 ATF3、CHOP 和DR5 蛋白的表达 | 第51-52页 |
| ·ATF3 和 CHOP 在 SAHA 有效激活人 DR5 基因启动子的过程中发挥作用 | 第52-55页 |
| ·人 DR5 基因示意图 | 第52页 |
| ·人 DR5 基因启动子上对 SAHA 刺激产生反应的长度片段 | 第52-53页 |
| ·CHOP 在 SAHA 有效激活人 DR5 基因启动子的过程中发挥作用 | 第53-54页 |
| ·ATF3 在 SAHA 有效激活人 DR5 基因启动子的过程中发挥作用 | 第54-55页 |
| ·ATF3 参与 SAHA 和抗 DR5 竞争性单克隆抗体 DJR2-2 协同作用诱导 p53 缺陷的癌细胞凋亡的过程，并在其中起重要作用 | 第55-61页 |
| ·SAHA 和 DJR2-2 分别引起一定数量细胞死亡的作用浓度与作用时间 | 第55页 |
| ·ATF3 敲低能够明显降低 SAHA 和抗 DR5 竞争性单克隆抗体DJR2-2 协同作用诱导 p53 缺陷的癌细胞的死亡率 | 第55-56页 |
| ·ATF3 敲低能够明显增加 p53 缺陷的癌细胞对 SAHA 和抗 DR5竞争性单克隆抗体 DJR2-2 协同杀伤的抵抗 | 第56-57页 |
| ·ATF3 敲低抑制 SAHA 和抗 DR5 竞争性单克隆抗体 DJR2-2 协同作用诱导癌细胞凋亡的生物学证据 | 第57-58页 |
| ·细胞集落和细胞核的改变 | 第58-61页 |
| 第4章 讨论 | 第61-65页 |
| 第5章 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-83页 |
| 作者简介及在学期间科研成果 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
