| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 前言 | 第10-24页 |
| 1 木薯简介 | 第10-11页 |
| ·概述 | 第10页 |
| ·优势 | 第10页 |
| ·产业发展及现状 | 第10-11页 |
| 2 干旱胁迫 | 第11-16页 |
| ·干旱胁迫生理机制 | 第11-12页 |
| ·干旱胁迫分子机制 | 第12-16页 |
| ·干旱胁迫诱导的基因产物 | 第12-14页 |
| ·干旱胁迫信号转导途径 | 第14-16页 |
| 3 MYB转录因子 | 第16-19页 |
| ·植物中MYB转录因子主要特征 | 第16-17页 |
| ·MYB转录因子功能 | 第17页 |
| ·MYB转录因子响应非生物胁迫 | 第17-19页 |
| 4 启动子 | 第19-21页 |
| ·启动子基本结构 | 第19页 |
| ·启动子类型及功能 | 第19-21页 |
| ·组成型启动子 | 第19-20页 |
| ·组织特异型启动子 | 第20页 |
| ·诱导型启动子 | 第20-21页 |
| ·报告基因 | 第21页 |
| ·β-葡萄糖苷酸酶(GUS) | 第21页 |
| ·GFP基因 | 第21页 |
| 5 本研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 6 本实验技术路线 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-43页 |
| 1 实验材料 | 第24-26页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌种、载体及引物和测序 | 第24-25页 |
| ·分子生物学实验试剂和酶 | 第25页 |
| ·实验仪器设备 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-43页 |
| ·实验材料培养 | 第26页 |
| ·实验材料干旱处理 | 第26页 |
| ·RNA的提取及cDNA合成 | 第26页 |
| ·半定量P-PCR分析 | 第26-27页 |
| ·MeMYB63启动子序列分析及载体构建 | 第27-29页 |
| ·CTAB-PVP法提取木薯叶片DNA | 第27页 |
| ·PCR扩增MeMYB63基因5’上游片段 | 第27-28页 |
| ·PCR产物克隆鉴定及测序 | 第28-29页 |
| ·MeMYB63启动子序列分析 | 第29页 |
| ·MeMYB63启动子植物表达载体构建 | 第29页 |
| ·拟南芥中启动子的GUS表达分析 | 第29-32页 |
| ·获得重组农杆菌工程菌株 | 第30页 |
| ·制作农杆菌GV3101感受态细胞 | 第30页 |
| ·农杆菌冻融转化法 | 第30页 |
| ·拟南芥转化 | 第30-31页 |
| ·拟南芥培养 | 第30-31页 |
| ·农杆菌介导的真空渗入法转化拟南芥 | 第31页 |
| ·拟南芥种子抗性筛选及分离比例计算 | 第31页 |
| ·拟南芥转基因T2代的筛选及培养 | 第31页 |
| ·GUS组织化学染色分析 | 第31-32页 |
| ·试剂配制 | 第31-32页 |
| ·GUS染色 | 第32页 |
| ·观察定位 | 第32页 |
| ·MeMYB63基因的克隆、序列分析及植物表达载体构建 | 第32-34页 |
| ·MeMYB63基因结构分析 | 第32-33页 |
| ·PCR产物克隆鉴定及测序 | 第33-34页 |
| ·MeMYB63基因植物表达载体构建 | 第34页 |
| ·MeMYB63基因亚细胞定位 | 第34-36页 |
| ·烟草培养 | 第34-35页 |
| ·获得重组农杆菌工程菌株 | 第35页 |
| ·制作农杆菌LBA4404感受态细胞 | 第35页 |
| ·农杆菌转化 | 第35页 |
| ·重组农杆菌工程菌株PCR鉴定 | 第35页 |
| ·农杆菌注射渗透法转化烟草 | 第35-36页 |
| ·转录激活实验 | 第36-38页 |
| ·MeMYB63：：pGBKT7载体构建 | 第36-37页 |
| ·酵母转化 | 第37-38页 |
| ·溶液制备 | 第37页 |
| ·Y187酵母感受态制备 | 第37-38页 |
| ·转化Y187酵母感受态细胞 | 第38页 |
| ·PCR鉴定转化子 | 第38页 |
| ·X-α-gal显色反应 | 第38页 |
| ·点对点酵母单杂交实验鉴定转录结合域 | 第38-43页 |
| ·MeMYB63：：pGADT7载体构建 | 第38-39页 |
| ·MBS小片段Bait序列获得 | 第39-40页 |
| ·Bait菌株构建及质粒获得 | 第40页 |
| ·Bait质粒线性化 | 第40页 |
| ·酵母菌Y1HGold感受态细胞的制各 | 第40-41页 |
| ·Bait质粒的转化 | 第41-42页 |
| ·Bait菌株的鉴定 | 第42页 |
| ·点对点酵母单杂交鉴定转录结合域 | 第42-43页 |
| 结果与分析 | 第43-55页 |
| 1 RT-PCR半定量分析 | 第43页 |
| 2 MeMYB63启动子序列分析及载体构建 | 第43-47页 |
| ·PCR扩增MeMYB63基因5’上游片段 | 第43-44页 |
| ·MeMYB63启动子序列分析 | 第44-46页 |
| ·启动子植物表达载体构建 | 第46-47页 |
| 3 拟南芥中启动子的GUS表达分析 | 第47-48页 |
| ·拟南芥转化及T2代的筛选培养 | 第47页 |
| ·GUS组织化学染色分析 | 第47-48页 |
| 4 MeMYB63基因的克隆、分析及植物表达载体构建 | 第48-50页 |
| ·提取木薯栽培品种SC124的RNA及cDNA合成 | 第48页 |
| ·MeMYB63基因结构分析 | 第48-49页 |
| ·MeMYB63基因植物表达载体构建 | 第49-50页 |
| 5 MeMYB63基因亚细胞定位 | 第50-51页 |
| ·重组农杆菌工程菌株的PCR鉴定 | 第50页 |
| ·农杆菌介导的烟草瞬时转化系统观察融合蛋白的亚细胞定位 | 第50-51页 |
| 6 转录激活实验 | 第51-53页 |
| ·MeMYB63：：pGBKT7载体构建 | 第51-52页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第52页 |
| ·X-α-gal显色反应 | 第52-53页 |
| 7 点对点酵母单杂交鉴定转录结合域 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
