| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 一、大肠杆菌细胞周期概述(文献综述) | 第9-22页 |
| ·生长速度及调控 | 第10页 |
| ·DNA复制起始及调控 | 第10-15页 |
| ·oriC与DnaA | 第11-13页 |
| ·DNA复制起始调控 | 第13-15页 |
| ·染色体分离及其调控 | 第15-16页 |
| ·oriC位点和染色体左右臂的分离及调控 | 第15-16页 |
| ·ter位点的分离及调控 | 第16页 |
| ·细胞壁合成及调控 | 第16-18页 |
| ·FtsZ环的组装及其调控 | 第18-20页 |
| ·FtsZ环的组装 | 第18-19页 |
| ·FtsZ环组装的调控 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌细胞周期各事件相互协调 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌细胞周期各事件相互协调 | 第20页 |
| ·大肠杆菌细胞周期与周围环境营养相协调 | 第20-21页 |
| ·起始量(initiation mass)是大肠杆菌细胞周期重要指标 | 第21页 |
| ·总结 | 第21-22页 |
| 二、AspC介导的氨基酸代谢协调大肠杆菌细胞周期 | 第22-58页 |
| ·引言 | 第22-26页 |
| ·氨基酸与大肠杆菌细胞周期 | 第22-24页 |
| ·AspC是细胞内重要的氨基转移酶 | 第24-25页 |
| ·研究目的及意义 | 第25-26页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·菌种及质粒 | 第26-27页 |
| ·试剂 | 第27-29页 |
| ·培养基配制 | 第27-28页 |
| ·抗生素溶液配制 | 第28页 |
| ·核酸染料Hoechst33258配制 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·aspC基因的克隆 | 第29-31页 |
| ·aspC(包含启动子)的PCR | 第29-30页 |
| ·aspC PCR产物胶回收纯化 | 第30页 |
| ·aspC PCR产物与pACYC177的双酶切,纯化回收与连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物转化DH5α细胞 | 第31页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·挑选转化子,提质粒双酶切鉴定,测序 | 第31页 |
| ·一步失活法删除aspC基因 | 第31-33页 |
| ·Cam~R基因的PCR扩增 | 第32页 |
| ·制备BW25113/pKD46电转化感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·纯化的Cam~R PCR产物电转化BW25113/pKD46感受态细胞 | 第33页 |
| ·转化子PCR鉴定,测序 | 第33页 |
| ·P1转导(P1 transduction)构建双突变体 | 第33-34页 |
| ·P1噬菌体(P1 lysate)的制备 | 第33-34页 |
| ·P1转导受体菌 | 第34页 |
| ·细胞复制样式检测和平均染色体复制原点数值计算 | 第34-35页 |
| ·细胞复制样式检测 | 第34-35页 |
| ·平均染色体复制原点数(A.O.)计算 | 第35页 |
| ·细胞大小测量 | 第35页 |
| ·细胞生长速度测定 | 第35页 |
| ·细胞温度敏感性检测 | 第35页 |
| ·细胞内DnaA蛋白浓度检测 | 第35-37页 |
| ·蛋白样品制备 | 第35-36页 |
| ·Western-blot检测 | 第36-37页 |
| ·细胞内总蛋白水平检测 | 第37页 |
| ·起始量计算 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-56页 |
| ·aspC基因克隆 | 第37-38页 |
| ·aspC基因删除 | 第38页 |
| ·aspC基因缺失减慢细胞周期进程 | 第38-43页 |
| ·aspC基因缺失延迟DNA复制起始 | 第38-41页 |
| ·aspC基因缺失使细胞长度减小 | 第41-42页 |
| ·aspC基因缺失使细胞生长变慢 | 第42页 |
| ·aspC基因缺失并不明显改变DNA复制延伸速度 | 第42-43页 |
| ·AspC促进大肠杆菌细胞周期 | 第43页 |
| ·在ΔaspC突变体中过表达aspC基因使缺陷表型恢复 | 第43页 |
| ·在野生型细胞中过表达aspC基因对细胞周期有促进作用 | 第43页 |
| ·AspC可能通过影响单细胞DnaA的量来调控复制 | 第43-46页 |
| ·AspC缺失或过表达并不明显改变dnaA46,dnaB252和dnaC2的温度敏感性 | 第43-44页 |
| ·AspC缺失后DnaA蛋白浓度没有明显变化 | 第44-45页 |
| ·AspC缺失后单细胞DnaA蛋白量降低 | 第45-46页 |
| ·AspC可能通过影响天冬氨酸合成水平来影响细胞周期 | 第46页 |
| ·△aspC并不通过(p)ppGpp来影响复制起始 | 第46-50页 |
| ·AspC作为氨基酸代谢中特殊的氨基转移酶来协调细胞周期 | 第50-53页 |
| ·TyrB的删除并不影响复制起始时间和细胞大小 | 第50-51页 |
| ·其他氨基酸代谢途径相关酶的失活并不影响细胞周期 | 第51-53页 |
| ·起始量(Initiation mass)并不与细胞生长速度呈线性相关 | 第53-54页 |
| ·AspC影响沙门氏菌细胞周期 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第70页 |
