| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| ·弓形虫及弓形虫病概述 | 第13页 |
| ·抗弓形虫疫苗的研究进展 | 第13-15页 |
| ·顶复门原虫钙依赖蛋白激酶的研究进展 | 第15-22页 |
| ·CDPKs 的结构与进化 | 第16-17页 |
| ·顶复门原虫 CDPKs 的生物学功能 | 第17-20页 |
| ·CDPKs 的应用研究 | 第20页 |
| ·展望与总结 | 第20-22页 |
| 第二章 弓形虫钙依赖蛋白激酶基因序列变异的研究 | 第22-30页 |
| ·材料与方法 | 第22-24页 |
| ·虫株 | 第22-23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第23页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·样品处理及弓形虫 DNA 提取 | 第23页 |
| ·TgCDPK2 基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·TgCDPK2 基因的纯化与测序 | 第24页 |
| ·TgCDPK2 基因序列及进化分析 | 第24页 |
| ·CDPKs 基因家族序列分析 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-29页 |
| ·TgCDPK2 基因的 PCR 扩增 | 第24-25页 |
| ·TgCDPK2 基因的序列分析 | 第25-27页 |
| ·TgCDPK2 基因序列系统发生树 | 第27页 |
| ·弓形虫 CDPKs 基因的序列分析 | 第27-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 弓形虫钙依赖蛋白激酶 3，5，6 抗原表位的预测 | 第30-39页 |
| ·材料与方法 | 第30-32页 |
| ·虫株的保存与复苏 | 第30页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第30页 |
| ·预测抗原表位的生物信息学软件 | 第30-31页 |
| ·弓形虫总 RNA 的提取 | 第31页 |
| ·引物设计及基因扩增 | 第31页 |
| ·PCR 纯化产物的连接 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-37页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 基因的 PCR 扩增 | 第32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·跨膜结构域的分析 | 第33-34页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 蛋白亲水性区域的分析 | 第34页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 蛋白二级结构的预测 | 第34页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 蛋白柔性区域的预测 | 第34-35页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 蛋白表面可及性的分析 | 第35页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 蛋白抗原表位的预测 | 第35-36页 |
| ·TgCDPK5 和 TgCDPK6 蛋白 3D 模型的建立 | 第36-37页 |
| ·TgCDPK5 和 TgCDPK6 蛋白 3D 模型的验证 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 弓形虫钙依赖蛋白激酶 3，5，6 核酸疫苗的研究 | 第39-60页 |
| ·材料与方法 | 第39-47页 |
| ·虫株与实验动物 | 第39页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第39-40页 |
| ·弓形虫阳性血清的制备 | 第40页 |
| ·弓形虫总 RNA 的提取 | 第40页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·RT-PCR 体系及反应条件 | 第40-41页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 基因序列的测定 | 第41页 |
| ·载体及目的片段的回收与连接 | 第41-43页 |
| ·连接产物的转化 | 第43页 |
| ·弓形虫 CDPK3，CDPK5 和 CDPK6 重组蛋白表达与纯化 | 第43页 |
| ·弓形虫 pVAX-K3，pVAX-K5 和 pVAX-K6 核酸疫苗的制备 | 第43-44页 |
| ·pVAX-K3，pVAX-K5 和 pVAX-K6 重组质粒的体外表达 | 第44-45页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第45页 |
| ·抗体的检测 | 第45-46页 |
| ·免疫鼠脾细胞悬液的制备 | 第46页 |
| ·免疫效果的评价 | 第46-47页 |
| ·免疫保护力试验 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-58页 |
| ·弓形虫 CDPK3，CDPK5 和 CDPK6 基因的扩增 | 第47-48页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 基因 T 载体的连接 | 第48页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 基因原核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·TgCDPK3，TgCDPK5 和 TgCDPK6 基因真核表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·弓形虫 CDPK3，CDPK5 和 CDPK6 蛋白的原核表达 | 第51-52页 |
| ·弓形虫 CDPK3，CDPK5 和 CDPK6 基因的体外表达 | 第52-53页 |
| ·弓形虫 CDPK3，CDPK5 和 CDPK6 核酸疫苗免疫效果的研究 | 第53-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 弓形虫钙依赖蛋白激酶蛋白 6 与棒状体 18 蛋白混合疫苗的研究 | 第60-70页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·虫株与实验动物 | 第60页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第60页 |
| ·弓形虫总 RNA 的提取 | 第60-61页 |
| ·引物设计 | 第61页 |
| ·PCR 体系及反应条件 | 第61页 |
| ·TgROP18 基因的测定 | 第61页 |
| ·TgROP18 基因与 pET-30a 载体的酶切与连接 | 第61-62页 |
| ·连接产物的转化 | 第62页 |
| ·弓形虫 ROP18 重组蛋白的表达与纯化 | 第62页 |
| ·弓形虫 CDPK6 和 ROP18 蛋白疫苗的制备 | 第62页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第62页 |
| ·抗体的检测 | 第62-63页 |
| ·免疫鼠脾细胞悬液的制备 | 第63页 |
| ·免疫效果的评价 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-69页 |
| ·弓形虫 ROP18 基因的扩增及 pMD-ROP18 质粒的鉴定 | 第63页 |
| ·重组 TgROP18 蛋白的表达与纯化 | 第63-64页 |
| ·TgROP18 和 TgCDPK6 蛋白混合疫苗免疫效果的研究 | 第64-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 第六章 全文结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81-82页 |
