| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 中国烟草病毒病的发生与危害 | 第12-13页 |
| 2 病毒的检测方法和技术 | 第13-17页 |
| ·指示植物法 | 第13页 |
| ·电子显微镜诊断法 | 第13-15页 |
| ·血清学检测法 | 第15页 |
| ·分子生物学方法 | 第15-16页 |
| ·基因芯片技术 | 第16-17页 |
| 3 胶体金免疫层析技术 | 第17-18页 |
| 4 福建省烟草种植简介 | 第18页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 烟草普通花叶病毒的提纯及多克隆抗体的制备 | 第20-32页 |
| 1 实验材料、主要试剂及仪器设备 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-27页 |
| ·烟草花叶病毒的分离与繁殖 | 第20-21页 |
| ·烟草花叶病毒的提纯 | 第21页 |
| ·烟草花叶病毒纯度鉴定及浓度测定 | 第21-23页 |
| ·电镜检测 | 第21-22页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第22-23页 |
| ·紫外检测及浓度测定 | 第23页 |
| ·免疫方法 | 第23-24页 |
| ·兔血的处理 | 第24页 |
| ·抗血清的纯化 | 第24-25页 |
| ·抗体浓度测定及纯度鉴定 | 第25-26页 |
| ·抗体效价测定 | 第26-27页 |
| 3 实验结果与分析 | 第27-30页 |
| ·烟草花叶病毒的电镜检测 | 第27页 |
| ·烟草花叶病毒的SDS-PAGE电泳检测 | 第27-28页 |
| ·烟草花叶病毒的紫外检测及浓度计算 | 第28-29页 |
| ·TMV抗体浓度测定 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第29页 |
| ·效价测定 | 第29-30页 |
| 4 小结和讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 烟草花叶病毒胶体金层析试纸条的制备 | 第32-43页 |
| 1 实验材料、主要试剂及仪器设备 | 第32页 |
| ·主要材料 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-37页 |
| ·玻璃器皿的清洗 | 第32页 |
| ·胶体金颗粒的制备 | 第32-33页 |
| ·胶体金颗粒的鉴定 | 第33-34页 |
| ·紫外鉴定 | 第33页 |
| ·电镜鉴定 | 第33-34页 |
| ·稳定胶体金最适蛋白用量的确定与最适pH的确定 | 第34-35页 |
| ·最适蛋白用量的确定 | 第34页 |
| ·最适pH的确定 | 第34-35页 |
| ·金标抗体的标记与活性检测 | 第35-36页 |
| ·金标抗体的标记与纯化 | 第35页 |
| ·标记抗体活性的检测 | 第35-36页 |
| ·试纸条材料的选择与组装 | 第36-37页 |
| ·样品垫的选择 | 第36页 |
| ·结合垫的选择 | 第36页 |
| ·NC膜的选择 | 第36页 |
| ·试纸条的组装 | 第36页 |
| ·试纸条的使用方法与结果判断 | 第36-37页 |
| ·试纸条的性能测试 | 第37页 |
| ·显色时间的测试 | 第37页 |
| ·灵敏度的测试 | 第37页 |
| ·特异性的测试 | 第37页 |
| ·准确性的测试 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-43页 |
| ·胶体金颗粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·紫外鉴定 | 第37-38页 |
| ·电镜鉴定 | 第38页 |
| ·最适蛋白量与最佳pH的确定 | 第38-40页 |
| ·最适蛋白量的确定 | 第38-39页 |
| ·最适pH的确定 | 第39-40页 |
| ·抗体活性的检测 | 第40页 |
| ·试纸条材料的选择 | 第40页 |
| ·试纸条的性能测试 | 第40-43页 |
| ·显色时间的测试 | 第40页 |
| ·灵敏度的测试 | 第40-41页 |
| ·特异性的测试 | 第41-42页 |
| ·准确性的测试 | 第42-43页 |
| 第四章 烟草黄瓜花叶病毒和马铃薯Y病毒多克隆抗体的制备及其ELISA试剂盒的研制 | 第43-56页 |
| 1 实验材料、实验试剂及仪器设备 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·实验试剂 | 第43页 |
| ·仪器设备 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-50页 |
| ·目的基因的扩增 | 第43-46页 |
| ·引物设计 | 第43-44页 |
| ·烟草病叶总RNA的提取 | 第44页 |
| ·RT-PCR合成cDNA第一链 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增及电泳检测 | 第45页 |
| ·目的基因的纯化与回收 | 第45-46页 |
| ·载体的构建 | 第46-50页 |
| ·入门载体的构建 | 第46页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·连接产物的转化 | 第46-47页 |
| ·质粒的提取 | 第47页 |
| ·序列测定 | 第47页 |
| ·表达载体的构建及工程菌株的制备 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及可溶性检测 | 第48页 |
| ·抗体的制备及效价测定 | 第48-49页 |
| ·Western blot检测 | 第49页 |
| ·ELISA检测试剂盒的制备 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-55页 |
| ·CMV-CP基因和PVY-CP基因的扩增及电泳检测 | 第51页 |
| ·入门载体的菌落PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·序列测定 | 第52页 |
| ·表达工程菌Rosetta的菌落鉴定 | 第52-53页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE检测 | 第53-54页 |
| ·可溶性检测 | 第54页 |
| ·效价测定 | 第54-55页 |
| ·Western blot 检测 | 第55页 |
| 4 小结与讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 福建省烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯Y病毒的调查 | 第56-59页 |
| 1 实验材料、主要试剂 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| 2 实验方法 | 第56页 |
| ·样品采集 | 第56页 |
| ·样品检测 | 第56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-58页 |
| ·烟草叶片样品的检测 | 第56-57页 |
| ·烟草土壤样品的检测 | 第57页 |
| ·烟草品种发病率调查 | 第57-58页 |
| 4 小结与讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 全文讨论与展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 附录 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
