| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-19页 |
| ·链霉菌中调控基因的研究概况 | 第13-15页 |
| ·糖多孢红霉菌中调控基因的研究概况 | 第15-16页 |
| ·研究路线 | 第16-17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| ·构建TetR基因缺失突变体 | 第17页 |
| ·抑菌实验初步筛选得到参与红霉素生物合成的调控基因 | 第17页 |
| ·对SACE_3986基因进行功能验证 | 第17页 |
| ·高产菌株WB中缺失SACE_3986基因并研究其红霉素产量变化 | 第17-18页 |
| ·△SACE_3986与出发菌株A226中相关基因的转录分析 | 第18页 |
| ·EMSA分析 | 第18页 |
| ·研究意义 | 第18-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-42页 |
| ·材料 | 第19-29页 |
| ·菌种和质粒 | 第19-20页 |
| ·引物 | 第20-21页 |
| ·培养基与培养条件 | 第21-23页 |
| ·缓冲液 | 第23-27页 |
| ·DNA标记物与工具酶 | 第27页 |
| ·试剂盒与生化试剂 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-42页 |
| ·目的DNA的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| ·质粒DNA的小量抽提 | 第30-31页 |
| ·目的DNA的回收纯化 | 第31页 |
| ·DNA的酶切与连接体系 | 第31-32页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备与转化 | 第32-33页 |
| ·糖多孢红霉菌基因组的小量制备 | 第33-34页 |
| ·糖多孢红霉菌基因组的大量制备 | 第34页 |
| ·糖多孢红霉菌原生质体的制备与转化 | 第34-36页 |
| ·糖多孢红霉菌孢子的保藏 | 第36页 |
| ·红霉素发酵产物的抑菌活性检测 | 第36页 |
| ·红霉素发酵液的萃取 | 第36-37页 |
| ·红霉素发酵液的HPLC分析 | 第37-38页 |
| ·实时荧光定量PCR分析 | 第38-40页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第40-41页 |
| ·EMSA分析 | 第41-42页 |
| 第3章 △SACE_3986突变体的构建 | 第42-48页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-47页 |
| ·△SACE_3986突变体的构建 | 第42-46页 |
| ·抑菌实验初步分析△SACE_3986突变体红霉素产量变化 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第4章 SACE_3986的回复与过表达 | 第48-55页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-54页 |
| ·pIB1393986质粒的构建 | 第48-49页 |
| ·回复菌株△SACE_3986/pIB1393986的构建 | 第49-50页 |
| ·过表达菌株A226/pIB1393986的构建 | 第50-51页 |
| ·SACE_3986相关突变体产红霉素A的HPLC定量分析 | 第51-52页 |
| ·SACE_3986对菌株形态分化的影响 | 第52-53页 |
| ·△SACE_3986突变株生物量的测定 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 第5章 WB/△SACE_3986突变体的构建 | 第55-58页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-57页 |
| ·WB/△SACE_3986突变体的构建 | 第55-56页 |
| ·红霉素高产菌株WB/△SACE_3986的产量分析 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第6章 △SACE_3986突变体相关基因转录分析 | 第58-60页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第7章 SACE_3986蛋白的EMSA分析 | 第60-65页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-64页 |
| ·pET28a3986蛋白载体的构建 | 第60-61页 |
| ·SACE_3986蛋白表达与纯化 | 第61-62页 |
| ·SACE_3986蛋白的EMSA实验 | 第62-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第8章 SACE_3985过表达菌株的构建及其红霉素产量分析 | 第65-69页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-68页 |
| ·pIB1393985质粒的构建 | 第65-66页 |
| ·SACE_3985过表达菌株的构建 | 第66-67页 |
| ·SACE_3985过表达菌株的产量分析 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第9章 总结 | 第69-71页 |
| ·获得的主要结果 | 第69-70页 |
| ·创新点 | 第70页 |
| ·下一步研究计划 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 硕士期间发表的论文及专利 | 第77页 |
