| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 一 酵母背景简介 | 第11-12页 |
| 1 酵母的基因组的主要特征 | 第11-12页 |
| 2 酵母作为模式生物的优势 | 第12页 |
| 二 核糖体蛋白研究概况 | 第12-16页 |
| 1 核糖体的研究历史及意义 | 第12-14页 |
| 2 核糖体编码基因的表达与调控 | 第14-15页 |
| ·rDNA的转录与调控 | 第14页 |
| ·核糖体蛋白基因的表达及调控 | 第14-15页 |
| 3 核糖体蛋白功能研究 | 第15-16页 |
| 三 酵母细胞的凝絮以及相关的细胞表面蛋白 | 第16-21页 |
| 1 凝絮的概念和分类 | 第16-18页 |
| 2 无性絮凝的主要特征 | 第18-20页 |
| ·絮凝是由细胞表面的蛋白质造成的 | 第18-19页 |
| ·多种因素引起细胞絮凝 | 第19-20页 |
| ·絮凝由多种信号转导通路控制 | 第20页 |
| 3 研究絮凝及相关的细胞壁蛋白的意义 | 第20-21页 |
| 四 本论文的研究目的和主要研究内容 | 第21-23页 |
| 第二章 核糖体蛋白基因敲除引起的细胞絮凝的相关细胞壁蛋白的研究 | 第23-43页 |
| 第一节 qRT-PCR分析部分细胞表面蛋白的表达情况 | 第23-27页 |
| 1 材料与方法 | 第23-26页 |
| ·酵母细胞mRNA的提取和cDNA合成 | 第23-24页 |
| ·qRT-PCR引物的设计 | 第24-25页 |
| ·细胞壁表面蛋白的转录水平分析 | 第25-26页 |
| 2 结果 | 第26-27页 |
| ·qRT-PCR产物特异性分析 | 第26页 |
| ·细胞壁表面蛋白的转录水平分析 | 第26-27页 |
| 3 讨论 | 第27页 |
| 第二节 过表达部分细胞表面蛋白对细胞絮凝影响的研究 | 第27-35页 |
| 1 材料与方法 | 第28-32页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·粟酒裂殖酵母SP-Q01基因组的提取 | 第28-29页 |
| ·碱法小提质粒pREP3X | 第29页 |
| ·细胞壁蛋白基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·细胞壁蛋白的酵母表达质粒的构建 | 第30页 |
| ·过表达细胞壁蛋白基因的酵母菌株的构建 | 第30-32页 |
| ·过表达细胞壁蛋白基因的酵母菌株的形态观察 | 第32页 |
| 2 结果 | 第32-34页 |
| ·酵母基因组提取 | 第32页 |
| ·细胞壁蛋白基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·细胞壁蛋白基因的酵母表达质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·过表达细胞壁蛋白基因的酵母菌株的形态观察 | 第34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 第三节 敲除部分细胞壁蛋白基因对细胞絮凝影响的研究 | 第35-43页 |
| 1. 材料与方法 | 第35-40页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·敲除片段的构建 | 第35-38页 |
| ·敲除细胞壁蛋白基因的酵母菌株的构建 | 第38-39页 |
| ·敲除细胞壁蛋白基因的菌株的形态观察 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-41页 |
| ·敲除细胞壁蛋白基因的酵母菌株的构建 | 第40-41页 |
| ·敲除细胞壁蛋白基因的菌株的形态观察 | 第41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 S.Cerevisiae中核糖体蛋白基因的表达与细胞絮凝的关系的研究 | 第43-60页 |
| 第一节 S.Cerevisiae核糖体蛋白基因的敲除及相关研究 | 第43-50页 |
| 1 材料与方法 | 第43-48页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·敲除片段的构建 | 第43-45页 |
| ·敲除细胞壁蛋白基因的酵母菌株的构建 | 第45-46页 |
| ·敲除细胞壁蛋白基因的菌株的形态观察 | 第46页 |
| ·qRT-PCR分析rps26BΔ菌株核糖体蛋白基因表达情况 | 第46-48页 |
| 2 结果 | 第48-50页 |
| ·敲除核糖体蛋白基因的酵母菌株的构建 | 第48-49页 |
| ·敲除核糖体蛋白基因的菌株的形态观察 | 第49页 |
| ·rps26BΔ菌株核糖体蛋白基因的转录水平分析 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50页 |
| 第二节 flo8回复突变以及RPG表达与细胞絮凝关系的研究 | 第50-56页 |
| 1 材料与方法 | 第50-54页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·Overlap PCR构建flo8基因回复突变的融合片段 | 第50-52页 |
| ·flo8回复突变的酵母菌株的构建 | 第52页 |
| ·絮凝和非絮凝菌株的形态观察 | 第52-53页 |
| ·qRT-PCR分析絮凝和非絮凝菌株RPG表达情况 | 第53-54页 |
| 2 结果 | 第54-56页 |
| ·flo8回复突变的酵母菌株的构建 | 第54页 |
| ·絮凝和非絮凝菌株的形态观察 | 第54-55页 |
| ·絮凝和非絮凝菌株核糖体蛋白基因表达分析 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56页 |
| 第三节 S.Cerevisiae的有性絮凝中核糖体基因表达分析 | 第56-60页 |
| 1 材料与方法 | 第56-58页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·诱导不同交配型酵母细胞交配和形态观察 | 第56-57页 |
| ·有性絮凝时核糖体蛋白的转录水平分析 | 第57-58页 |
| 2 结果 | 第58-59页 |
| ·诱导不同交配型酵母细胞交配和形态观察 | 第58页 |
| ·有性絮凝时核糖体蛋白的转录水平分析 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 核糖体蛋白编码基因rpl32-1和rpl32-2的功能差异的研究 | 第60-80页 |
| 第一节 过表达rpl32-1和rpl32-2对细胞的影响的研究 | 第60-64页 |
| 1 材料与方法 | 第60-61页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·过表达rpl32-1和rpl32-2菌株生长特性研究 | 第60-61页 |
| ·通过流式细胞术检测细胞状态 | 第61页 |
| ·细胞热抗性差异分析 | 第61页 |
| 2 结果 | 第61-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 第二节 Co-IP筛选与RPL32-1和RPL32-2相作用的靶蛋白 | 第64-73页 |
| 1 材料与方法 | 第64-70页 |
| ·实验材料 | 第64页 |
| ·RPL32蛋白的特异性抗体的纯化 | 第64-67页 |
| ·酵母细胞总蛋白的提取 | 第67页 |
| ·免疫共沉淀分离与RPL32-1和RPL32-2相结合的蛋白 | 第67-68页 |
| ·Western Blot检验Co-IP实验结果 | 第68页 |
| ·SDS-PAGE检测Co-IP产物 | 第68-69页 |
| ·Co-IP产物的分离和质谱鉴定 | 第69-70页 |
| 2 结果 | 第70-72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 第三节 利用酵母双杂交验证RPL32与Grs1的相互作用 | 第73-80页 |
| 1 材料与方法 | 第74-76页 |
| ·实验材料 | 第74页 |
| ·质粒pGBKT7/rpl32-1与rpl32-2,pGADT7/grs1的构建 | 第74-75页 |
| ·AD/Prey和BD/Bait质粒共转化AH109 | 第75-76页 |
| 2 结果 | 第76-78页 |
| ·质粒 pGBKT7//p?2-J, pGBKT7/;p?2-2, pGADT7/pJ 的构建 | 第76-78页 |
| ·酵母双杂交结果 | 第78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 全文总结 | 第80-84页 |
| 参考文献 | 第84-97页 |
| 附录一：本论文中所使用的菌株 | 第97-98页 |
| 附录二：主要试剂 | 第98-99页 |
| 附录三：主要仪器 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
