| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| ·植物次生代谢简介 | 第11-18页 |
| ·植物次生代谢产物的分类 | 第11页 |
| ·植物次生代谢产物的功能研究 | 第11-14页 |
| ·植物次生代谢途径的研究进展 | 第14-16页 |
| ·植物次生代谢的调节 | 第16-18页 |
| ·黄酮类化合物的生物学研究进展 | 第18-21页 |
| ·黄酮类化合物的结构 | 第18页 |
| ·黄酮类化合物的生理活性 | 第18-19页 |
| ·黄酮类化合物的合成途径 | 第19-20页 |
| ·黄酮类化合物代谢途径的主要关键酶 | 第20-21页 |
| ·黄酮-3-羟化酶研究进展 | 第21-23页 |
| ·F3H 基因的结构与功能 | 第21页 |
| ·F3H 蛋白的催化机制研究 | 第21-22页 |
| ·F3H 蛋白的表达调控 | 第22-23页 |
| ·原核表达系统及包涵体纯化 | 第23-25页 |
| ·外源基因表达系统 | 第23页 |
| ·包涵体简介 | 第23页 |
| ·包涵体形成因素 | 第23-25页 |
| ·包涵体蛋白的溶解 | 第25页 |
| ·包涵体蛋白的复性 | 第25页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第25-26页 |
| ·研究的目的、意义及主要研究内容 | 第26-27页 |
| ·研究的目的和意义 | 第26页 |
| ·主要研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 苦荞黄酮-3-羟化酶序列的生物信息学分析 | 第27-33页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27页 |
| ·苦荞黄酮-3-羟化酶基因的序列分析 | 第27页 |
| ·苦荞黄酮-3-羟化酶的功能及结构预测 | 第27页 |
| ·苦荞黄酮-3-羟化酶系统发育树的构建 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-31页 |
| ·苦荞黄酮-3-羟化酶基因序列的分析 | 第27-28页 |
| ·苦荞黄酮-3-羟化酶的功能及结构预测结果 | 第28-30页 |
| ·苦荞 F3H 蛋白的系统发育树分析 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 苦荞黄酮-3-羟化酶原核表达载体的构建 | 第33-40页 |
| ·实验材料与试剂 | 第33-34页 |
| ·菌种与质粒 | 第33页 |
| ·主要的工具酶及试剂 | 第33页 |
| ·主要实验仪器 | 第33页 |
| ·主要溶液的配方 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-38页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·质粒 pET47b 与 pTriplEx2-TrF3H 的提取 | 第34-35页 |
| ·黄酮-3-羟化酶基因截短体（TrF3H）序列的 PCR 扩增 | 第35页 |
| ·PCR 产物及载体 pET47b 的双酶切 | 第35页 |
| ·切胶回收双酶切产物 | 第35-36页 |
| ·载体与目的片段连接 | 第36页 |
| ·连接产物转化 Top10 | 第36-37页 |
| ·原核表达载体的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| ·实验结果与分析 | 第38-39页 |
| ·目标片段的 PCR 扩增 | 第38页 |
| ·重组表达载体的双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 目的基因的诱导表达及亲和纯化 | 第40-50页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·菌种与质粒 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要溶液的配制 | 第40-41页 |
| ·主要实验仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·重组质粒转化表达载体 | 第41页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·目的蛋白 SDS-PAGE 检测 | 第42-44页 |
| ·目的蛋白的可溶性分析 | 第44页 |
| ·包涵体纯化 | 第44页 |
| ·目的蛋白的钴离子螯合层析 | 第44-45页 |
| ·包涵体复性 | 第45页 |
| ·目的蛋白的 His-tag 鉴定 | 第45页 |
| ·实验结果与分析 | 第45-48页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白的表达形式分析 | 第46-47页 |
| ·包涵体的纯化 | 第47页 |
| ·目的蛋白的 His 标签鉴定 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·原核表达宿主的选择 | 第48-49页 |
| ·包涵体复性 | 第49页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 第五章 TrF3H 的多克隆抗体制备及 western blotting 检测 | 第50-54页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·实验试剂 | 第50页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·主要实验仪器 | 第50页 |
| ·主要溶液配制 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白的浓度测定及多克隆抗体制备 | 第51页 |
| ·苦荞中 F3H 的 Western blotting 分析 | 第51-52页 |
| ·实验结果与分析 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第52页 |
| ·多克隆抗体的 Western blotting 检测 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第六章 总结与展望 | 第54-55页 |
| ·总结 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
