海洋产毒素细菌的筛选和产毒机理的初步研究
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1. 海洋微生物研究意义 | 第11页 |
| 2. 海洋微生物多样性 | 第11-17页 |
| ·海洋病毒 | 第12-13页 |
| ·海洋细菌 | 第13-14页 |
| ·海洋真菌 | 第14-15页 |
| ·海洋古生菌 | 第15-16页 |
| ·海洋微藻 | 第16-17页 |
| 3. 海洋毒素 | 第17-20页 |
| ·海洋毒素种类 | 第18-20页 |
| 4. 海洋毒素研究方法 | 第20-22页 |
| ·海洋毒素检测 | 第20-21页 |
| ·海洋毒素筛选 | 第21页 |
| ·海洋毒素作用机制研究 | 第21-22页 |
| 第二章 近海海水和深海沉积物中细菌多样性分析 | 第22-34页 |
| 1. 实验材料及方法 | 第22-27页 |
| ·样品来源 | 第22页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·菌株的分离纯化和保存 | 第24页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·细菌16SrRNA基因序列的扩增 | 第25-26页 |
| ·16SrRNA基因PCR产物纯化 | 第26页 |
| ·菌株16SrRNA基因的鉴定 | 第26-27页 |
| 2. 结果与分析 | 第27-33页 |
| ·海洋细菌的分离和菌种纯化 | 第27-28页 |
| ·海洋细菌的分类鉴定 | 第28-32页 |
| ·海洋细菌的种属分布 | 第32-33页 |
| 3. 讨论 | 第33页 |
| ·不同样品中海洋细菌数量和多样性的差异 | 第33页 |
| ·培养基对菌株分离影响 | 第33页 |
| 4. 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 产毒素海洋细菌的筛选 | 第34-43页 |
| 1. 实验材料及方法 | 第34-36页 |
| ·菌株和细胞 | 第34页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·血平板溶血测试 | 第34-35页 |
| ·海洋细菌发酵液的前处理 | 第35页 |
| ·海洋细菌发酵液处理HEK293细胞 | 第35-36页 |
| 2. 结果与分析 | 第36-41页 |
| ·产毒素海洋细菌的筛选 | 第36-39页 |
| ·产毒素海洋细菌的种属分布 | 第39-41页 |
| 3. 讨论 | 第41-42页 |
| ·关于产溶血素细菌的筛选方法 | 第41页 |
| ·影响MTT细胞毒性试验结果准确性的实验因素 | 第41页 |
| ·产毒素海洋细菌的分布 | 第41-42页 |
| 4. 小结 | 第42-43页 |
| 第四章 环境因素对深海螺旋菌产毒的影响 | 第43-55页 |
| 1. 实验材料及方法 | 第43-47页 |
| ·实验菌株 | 第43页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·引物 | 第43页 |
| ·不同温度下的溶血测试 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE分析细菌蛋白表达 | 第44页 |
| ·细菌总RNA提取 | 第44-45页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR | 第46-47页 |
| 2. 结果与分析 | 第47-53页 |
| ·温度对深海螺旋菌溶血现象的影响 | 第47-49页 |
| ·温度对溶血素hlyA基因表达量的影响 | 第49-51页 |
| ·温度对菌株蛋白表达的影响 | 第51-53页 |
| 3. 讨论 | 第53-54页 |
| ·关于蛋白表达差异 | 第53页 |
| ·RNA提取质量对后续实验的影响 | 第53页 |
| ·引物的设计 | 第53页 |
| ·内参的选择 | 第53-54页 |
| 4. 小结 | 第54-55页 |
| 总结与展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
