| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-24页 |
| 1 淀粉与淀粉酶 | 第14-15页 |
| 2 低聚糖 | 第15-18页 |
| ·低聚糖概述 | 第15页 |
| ·低聚糖功能 | 第15-16页 |
| ·低聚糖获得途径 | 第16页 |
| ·麦芽四糖概述 | 第16-17页 |
| ·生产发展现状 | 第17-18页 |
| 3 麦芽四糖淀粉酶 | 第18-22页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶的发现历程 | 第18-19页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶研究现状 | 第19-22页 |
| ·不足与展望 | 第22页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 麦芽四糖淀粉酶基因在大肠杆菌中克隆及表达条件优化研究 | 第24-55页 |
| 前言 | 第24页 |
| 第一节 麦芽四糖淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及活性研究 | 第24-45页 |
| 1 材料 | 第25-27页 |
| ·菌种与质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·常用溶液配制 | 第25-26页 |
| ·主要仪器和设备 | 第26-27页 |
| ·基因优化网址 | 第27页 |
| ·计算机分析软件 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-34页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶基因优化 | 第27页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-mta在大肠杆菌中的克隆 | 第27-30页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶诱导表达及可溶性鉴定 | 第30-31页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶的提取及分离纯化 | 第31-32页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶酶学性质分析 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-44页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶基因mta优化合成 | 第34-36页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-mta在大肠杆菌中的克隆 | 第36-37页 |
| ·融合麦芽四糖淀粉酶的诱导表达及可溶性鉴定 | 第37-39页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶的提取及分离纯化 | 第39-40页 |
| ·酶活力及蛋白浓度 | 第40-41页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶酶学性质分析 | 第41-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第二节 麦芽四糖淀粉酶在大肠杆菌中表达条件的优化 | 第45-55页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·菌种 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·主要仪器和设备 | 第46页 |
| ·计算机分析软件 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-48页 |
| ·菌种活化 | 第46页 |
| ·菌种生长曲线绘制 | 第46-47页 |
| ·IPTG诱导表达优化 | 第47-48页 |
| ·乳糖自诱导对麦芽四糖淀粉酶表达的影响 | 第48页 |
| ·融合蛋白表达产量的计算 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-54页 |
| ·菌种生长曲线绘制 | 第48-49页 |
| ·通气量对IPTG诱导表达的影响 | 第49页 |
| ·诱导时间对IPTG诱导表达的影响 | 第49-50页 |
| ·培养温度对IPTG诱导表达的影响 | 第50-51页 |
| ·接种量对IPTG诱导表达的影响 | 第51页 |
| ·诱导剂浓度对IPTG诱导表达的影响 | 第51-52页 |
| ·优化前后IPTG诱导蛋白表达的比较 | 第52-53页 |
| ·乳糖自诱导对蛋白表达的影响 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 第三章 麦芽四糖淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌系统中克隆、表达及活性研究 | 第55-87页 |
| 前言 | 第55-56页 |
| 第一节 pHT43-mta/WB800的构建、表达及活性测定 | 第56-63页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| ·菌种与质粒 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56-57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·主要仪器和设备 | 第57页 |
| ·计算机分析软件 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-60页 |
| ·重组质粒pHT43-mta在大肠杆菌DH5α中的克隆 | 第57-59页 |
| ·重组质粒pHT_(43)-mta转化枯草芽孢杆菌WB800 | 第59-60页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌WB800中的诱导表达 | 第60页 |
| ·凝胶成像分析 | 第60页 |
| ·酶活性检测 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-63页 |
| ·重组质粒pHT43-mta大肠杆菌DH5α中的克隆 | 第60-62页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌WB800中的诱导表达 | 第62页 |
| ·目的蛋白的酶活性检测 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63页 |
| 第二节 pWB980-mta/1A474的构建、表达及活性研究 | 第63-74页 |
| 1 材料 | 第64-65页 |
| ·菌种与质粒 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·培养基 | 第64-65页 |
| ·主要仪器和设备 | 第65页 |
| ·计算机分析软件 | 第65页 |
| 2 方法 | 第65-68页 |
| ·重组质粒pWB980-mta的构建 | 第65-66页 |
| ·重组质粒pWB980-mta转化枯草芽孢杆菌1A474 | 第66-67页 |
| ·重组质粒pWB980-mta稳定性 | 第67页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌1A474中的表达 | 第67页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶活性检测 | 第67-68页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶的基本性质 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-73页 |
| ·pWB980-mta/1A474的构建 | 第68-69页 |
| ·重组质粒pWB980-mta稳定性 | 第69页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌1A474中的表达 | 第69-70页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶活性检测 | 第70-71页 |
| ·麦芽四糖淀粉酶的基本性质 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-74页 |
| 第三节 基因工程菌PWB980-mta/1A474表达条件优化 | 第74-87页 |
| 1 材料 | 第74-75页 |
| ·菌种 | 第74页 |
| ·主要试剂 | 第74页 |
| ·培养基 | 第74页 |
| ·主要仪器 | 第74-75页 |
| 2 方法 | 第75-78页 |
| ·菌种生长曲线绘制 | 第75页 |
| ·酶活性测定 | 第75页 |
| ·初始培养基的选择 | 第75-76页 |
| ·培养时间对菌体生长及产酶影响 | 第76页 |
| ·培养温度对菌体生长及产酶影响 | 第76页 |
| ·通气量对菌体生长及产酶影响 | 第76页 |
| ·接种量对菌体生长及产酶影响 | 第76-77页 |
| ·菌种活化时间对菌体生长及产酶影响 | 第77页 |
| ·碳氮源对菌体生长及产酶影响 | 第77页 |
| ·分泌促进剂对菌体生长及产酶影响 | 第77-78页 |
| ·优化前后菌体生长及酶活 | 第78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-86页 |
| ·菌种生长曲线绘制 | 第78页 |
| ·还原糖标准曲线 | 第78-79页 |
| ·初始培养基的选择 | 第79页 |
| ·培养时间对菌体生长及产酶影响 | 第79-80页 |
| ·培养温度对菌体生长及产酶影响 | 第80页 |
| ·通气量对菌体生长及产酶影响 | 第80-81页 |
| ·接种量对菌体生长及产酶影响 | 第81页 |
| ·菌种活化时间对菌体生产及产酶影响 | 第81-82页 |
| ·碳氮源对菌体生长及产酶影响 | 第82-83页 |
| ·分泌促进剂对菌体生长及产酶影响 | 第83-85页 |
| ·优化前后菌体生长及酶活 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-87页 |
| 第四章 总结与展望 | 第87-89页 |
| 1 总结 | 第87-88页 |
| 2 展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 附录 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
