| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-26页 |
| ·骨骼的结构 | 第16页 |
| ·骨质疏松概念 | 第16页 |
| ·骨质疏松发病现状 | 第16-17页 |
| ·人口老龄化加剧骨质疏松发病率 | 第17页 |
| ·骨质疏松危害 | 第17-18页 |
| ·骨质疏松临床表现 | 第18页 |
| ·骨质疏松临床诊断标准 | 第18-19页 |
| ·骨质疏松临床参考指标 | 第19页 |
| ·目前的治疗方法 | 第19-20页 |
| ·骨质疏松发病机理 | 第20-21页 |
| ·绝经后骨质疏松机制研究中的新发现 | 第21-23页 |
| ·本论文研究的主要内容及意义 | 第23-26页 |
| 第二章 构建pGEX-4T-1-hFSHβ原核表达载体 | 第26-41页 |
| ·引言 | 第26-27页 |
| ·试剂与仪器 | 第27-29页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-36页 |
| ·主要溶液配制方法 | 第29-30页 |
| ·分子生物学常用方法 | 第30-34页 |
| ·hFSHβ基因合成 | 第34页 |
| ·构建pGEX-4T-1-hFSHβ表达载体 | 第34-36页 |
| ·pGEX-4T-1-hFSHβ表达载体的鉴定 | 第36页 |
| ·pGEX-4T-1-hFSHβ表达载体的保存 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-39页 |
| ·hFSHβ成熟肽基因序列偏爱密码子优化 | 第36-37页 |
| ·pGEX-4T-1-hFSHβ酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·pGEX-4T-1-hFSHβ测序鉴定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·表达系统的选择 | 第39页 |
| ·表达载体的选择 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 GST-hFSHβ重组蛋白表达及纯化 | 第41-57页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·试剂与仪器 | 第41-43页 |
| ·主要试剂 | 第41-43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-51页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43-47页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第47页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第47页 |
| ·可溶性鉴定 | 第47-48页 |
| ·包涵体溶解 | 第48-49页 |
| ·蛋白纯化系统的蛋白纯化 | 第49-50页 |
| ·透析 | 第50页 |
| ·冷冻干燥 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-53页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第51-52页 |
| ·蛋白纯化 | 第52页 |
| ·蛋白冷冻干燥 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·选择FSHβ成熟肽原因 | 第53页 |
| ·蛋白高表达原因 | 第53-55页 |
| ·表达菌株的选择 | 第55-56页 |
| ·蛋白纯化方法的选择 | 第56页 |
| ·蛋白浓缩和定量方法的选择 | 第56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 外源性FSH促进破骨细胞分化的实验研究 | 第57-74页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·试剂耗材与仪器 | 第57-59页 |
| ·主要试剂耗材 | 第57-58页 |
| ·主要仪器 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-65页 |
| ·主要溶液配方 | 第59-60页 |
| ·骨髓单核细胞向破骨细胞的诱导分化 | 第60-61页 |
| ·破骨细胞的TRAP染色 | 第61-62页 |
| ·FSH对于破骨细胞诱导分化的影响 | 第62页 |
| ·抗血清对于FSH促破骨细胞分化的影响 | 第62页 |
| ·全骨髓向成骨细胞的诱导分化 | 第62-63页 |
| ·FSH对于成骨细胞诱导分化的影响 | 第63页 |
| ·Gomori改良钙钴法 | 第63-64页 |
| ·Von Kossa染色 | 第64-65页 |
| ·统计 | 第65页 |
| ·结果 | 第65-72页 |
| ·外源性FSH能够以剂量依赖方式促进破骨细胞分化 | 第65-68页 |
| ·抗hFSHβ抗血清能够阻断外源性FSH对破骨细胞分化的促进作用 | 第68-69页 |
| ·高浓度外源性FSH能够促进成骨细胞分化 | 第69-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| ·破骨细胞诱导方法的选择 | 第72页 |
| ·FSH对于骨细胞分化的影响 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 第五章 以GST-hFSHβ为抗原在体免疫治疗OVX大鼠的骨质疏松 | 第74-106页 |
| ·引言 | 第74-75页 |
| ·试剂和仪器 | 第75-77页 |
| ·主要试剂 | 第75-76页 |
| ·主要仪器 | 第76-77页 |
| ·方法 | 第77-89页 |
| ·骨质疏松大鼠动物模型的建立方法 | 第77页 |
| ·免疫动物方法 | 第77-78页 |
| ·动物分组及饲养 | 第78页 |
| ·血尿样品收集 | 第78-79页 |
| ·骨样品收集 | 第79页 |
| ·测抗体效价 | 第79页 |
| ·血尿检测 | 第79-80页 |
| ·Micro CT分析 | 第80页 |
| ·BMD检测 | 第80-81页 |
| ·生物力学检测 | 第81-82页 |
| ·组织学检测 | 第82-89页 |
| ·统计部分 | 第89页 |
| ·结果 | 第89-103页 |
| ·体重变化 | 第89-90页 |
| ·抗体效价 | 第90页 |
| ·BMD | 第90页 |
| ·血尿检测 | 第90-93页 |
| ·Micro CT结果 | 第93-96页 |
| ·生物力学检测结果 | 第96-100页 |
| ·组织学 | 第100-103页 |
| ·讨论 | 第103-105页 |
| ·GST标签对于hFSHβ重组蛋白免疫结果的影响 | 第103页 |
| ·FSH信号通路与成脂诱导 | 第103页 |
| ·抗体效价 | 第103页 |
| ·血尿结果分析 | 第103-104页 |
| ·力学检测结果分析 | 第104页 |
| ·骨质疏松治疗效果减弱分析 | 第104-105页 |
| ·本章小结 | 第105-106页 |
| 结论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-123页 |
| 缩略词 | 第123-125页 |
| 攻读博士学位期间取得的科研成果 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 作者简介 | 第128页 |
