中文摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-11页 |
前言 | 第11-14页 |
材料与方法 | 第14-30页 |
1 材料 | 第14-17页 |
·实验细胞 | 第14页 |
·病例标本 | 第14页 |
·主要仪器与设备 | 第14-15页 |
·主要生化试剂 | 第15页 |
·生物信息学分析软件 | 第15-16页 |
·real-time PCR 及特异性甲基化引物序列 | 第16-17页 |
2 实验方法 | 第17-30页 |
·细胞系的培养 | 第17-18页 |
·细胞生长条件 | 第17页 |
·细胞的复苏 | 第17页 |
·细胞的传代和扩大培养 | 第17-18页 |
·细胞的冻存 | 第18页 |
·脂质体介导的真核细胞转染 | 第18-19页 |
·细胞功能实验 | 第19-21页 |
·细胞增殖实验 | 第19页 |
·细胞周期实验 | 第19-20页 |
·细胞迁移实验 | 第20页 |
·细胞侵袭实验 | 第20-21页 |
·Real-time PCR | 第21-23页 |
·TRIZOl 法提取细胞总 RNA | 第21页 |
·RNA 质量的检测 | 第21页 |
·M-MLV 合成 cDNA 第一链 | 第21-22页 |
·Real-time PCR | 第22-23页 |
·miRNA real-time PCR | 第23-24页 |
·细胞小分子 RNA 提取 | 第23-24页 |
·miRNA 的 cDNA 第一链的合成 | 第24页 |
·miRNA 的 Real-time PCR 检测 | 第24页 |
·蛋白质印迹 | 第24-27页 |
·蛋白的提取及定量 | 第24-25页 |
·蛋白的 SDS-PAGE 电泳 | 第25页 |
·蛋白质的电转移 | 第25页 |
·PVDF 膜封闭及目得抗体孵育 | 第25-26页 |
·二次目得抗体的杂交 | 第26-27页 |
·DNA 的提取及甲基化检测 | 第27-28页 |
·阳性甲基化对照制备 | 第28-29页 |
·DNA 亚硫酸盐转换 | 第29-30页 |
·甲基化特异性 PCR(MSP) | 第30页 |
统计学处理 | 第30-31页 |
结果 | 第31-43页 |
1 胃癌组织中 miR-33b 的表达情及其与临床病理特点之间的关系 | 第31-33页 |
2 胃癌细胞系中 miR-33b 的表达情况及过表达 miR-33b 可抑制胃癌细胞的迁移,侵袭和增殖 | 第33-36页 |
3 miR-33b 靶向 c-Myc 基因抑制胃癌细胞的迁移,侵袭和增殖 | 第36-38页 |
4 胃癌细胞系中 miR-33b 的表达受甲基化调控 | 第38-39页 |
5 miR-33b 上游启动子区 CpG 岛甲基化程度检测 | 第39-42页 |
6 胃癌病例中 CpG 岛 1 的 QMSP 检测 | 第42-43页 |
讨论 | 第43-46页 |
结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-51页 |
文献综述 | 第51-61页 |
参考文献 | 第57-61页 |
个人简介 | 第61-62页 |
致谢 | 第62页 |