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DNA甲基化介导的microRNA-33b下调及其在胃癌中的作用

中文摘要第1-8页
Abstract第8-11页
前言第11-14页
材料与方法第14-30页
 1 材料第14-17页
   ·实验细胞第14页
   ·病例标本第14页
   ·主要仪器与设备第14-15页
   ·主要生化试剂第15页
   ·生物信息学分析软件第15-16页
   ·real-time PCR 及特异性甲基化引物序列第16-17页
 2 实验方法第17-30页
   ·细胞系的培养第17-18页
     ·细胞生长条件第17页
     ·细胞的复苏第17页
     ·细胞的传代和扩大培养第17-18页
     ·细胞的冻存第18页
   ·脂质体介导的真核细胞转染第18-19页
   ·细胞功能实验第19-21页
     ·细胞增殖实验第19页
     ·细胞周期实验第19-20页
     ·细胞迁移实验第20页
     ·细胞侵袭实验第20-21页
   ·Real-time PCR第21-23页
     ·TRIZOl 法提取细胞总 RNA第21页
     ·RNA 质量的检测第21页
     ·M-MLV 合成 cDNA 第一链第21-22页
     ·Real-time PCR第22-23页
   ·miRNA real-time PCR第23-24页
     ·细胞小分子 RNA 提取第23-24页
     ·miRNA 的 cDNA 第一链的合成第24页
     ·miRNA 的 Real-time PCR 检测第24页
   ·蛋白质印迹第24-27页
     ·蛋白的提取及定量第24-25页
     ·蛋白的 SDS-PAGE 电泳第25页
     ·蛋白质的电转移第25页
     ·PVDF 膜封闭及目得抗体孵育第25-26页
     ·二次目得抗体的杂交第26-27页
   ·DNA 的提取及甲基化检测第27-28页
   ·阳性甲基化对照制备第28-29页
   ·DNA 亚硫酸盐转换第29-30页
   ·甲基化特异性 PCR(MSP)第30页
统计学处理第30-31页
结果第31-43页
 1 胃癌组织中 miR-33b 的表达情及其与临床病理特点之间的关系第31-33页
 2 胃癌细胞系中 miR-33b 的表达情况及过表达 miR-33b 可抑制胃癌细胞的迁移,侵袭和增殖第33-36页
 3 miR-33b 靶向 c-Myc 基因抑制胃癌细胞的迁移,侵袭和增殖第36-38页
 4 胃癌细胞系中 miR-33b 的表达受甲基化调控第38-39页
 5 miR-33b 上游启动子区 CpG 岛甲基化程度检测第39-42页
 6 胃癌病例中 CpG 岛 1 的 QMSP 检测第42-43页
讨论第43-46页
结论第46-47页
参考文献第47-51页
文献综述第51-61页
 参考文献第57-61页
个人简介第61-62页
致谢第62页

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