| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-24页 |
| ·苏云金芽胞杆菌概述 | 第13-14页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第13页 |
| ·Cry 蛋白杀虫机理 | 第13-14页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的应用 | 第14-15页 |
| ·细菌的信号传导 | 第15-18页 |
| ·单组份信号系统 | 第15页 |
| ·双组份信号系统 | 第15-16页 |
| ·ECF sigma factor | 第16-18页 |
| ·Caseinolytic protease 基因(clpP)的研究进展 | 第18-22页 |
| ·LytSR 双组份信号系统的研究进展 | 第22-23页 |
| ·立题依据与目的意义 | 第23-24页 |
| ·立题依据 | 第23页 |
| ·目的意义 | 第23-24页 |
| 2 材料方法 | 第24-42页 |
| ·实验材料 | 第24-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第24-25页 |
| ·培养基与抗生素 | 第25-26页 |
| ·酶与生化试剂 | 第26页 |
| ·引物序列 | 第26-27页 |
| ·溶液和缓冲液 | 第27-30页 |
| ·仪器设备 | 第30-31页 |
| ·研究方法 | 第31-42页 |
| ·PCR 模板制备 | 第31页 |
| ·PCR 反应体系 | 第31页 |
| ·PCR 扩增程序 | 第31页 |
| ·加“A”尾巴反应体系 | 第31页 |
| ·重叠 PCR 扩增 | 第31-32页 |
| ·碱刺激下对数生长期 RNA 的提取方法 | 第32页 |
| ·RNA 纯化 | 第32-33页 |
| ·cDNA 的合成 | 第33-34页 |
| ·RealTime PCR 反应体系 | 第34页 |
| ·RealTime PCR 扩增反应程序 | 第34页 |
| ·酶切反应 | 第34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第35页 |
| ·目的 DNA 的回收 | 第35-36页 |
| ·DNA 片段的连接 | 第36页 |
| ·大肠杆菌热击感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·大肠杆菌热击转化—氯化钙法 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增片断的克隆 | 第37页 |
| ·苏云金芽胞杆菌电击感受态细胞制备 | 第37页 |
| ·苏云金芽胞杆菌电击转化方法 | 第37页 |
| ·序列的测定及分析 | 第37-38页 |
| ·同源重组诱变过程及突变体的获得 | 第38页 |
| ·碱刺激下生长曲线及细胞外 pH 变化分析 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第38页 |
| ·β-半乳糖苷酶活分析 | 第38-39页 |
| ·活芽胞计数分析 | 第39页 |
| ·苏云金芽胞杆菌芽胞的制备 | 第39-40页 |
| ·苏云金芽胞杆菌芽胞萌发实验 | 第40页 |
| ·菌株自溶性分析 | 第40页 |
| ·细胞外蛋白分析 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-67页 |
| ·芽胞杆菌在不同浓度 NaOH 刺激下的生长情况 | 第42-44页 |
| ·在 pH9-pH12 条件下 Bt 和 Bs 生长情况的比较 | 第42页 |
| ·Bt、Bc、Bs 菌株在不同浓度 NaOH 刺激下生长情况比较 | 第42-44页 |
| ·clpP 基因功能分析 | 第44-50页 |
| ·clpP 基因的生物信息学分析 | 第44页 |
| ·clpP 基因缺失片段的构建与鉴定 | 第44-46页 |
| ·clpP 基因缺失质粒的构建与鉴定 | 第46-47页 |
| ·clpP 基因缺失突变株的获得与验证 | 第47页 |
| ·clpP 基因缺失突变株对芽胞形成率的影响 | 第47-48页 |
| ·clpP 基因缺失突变体在不同 pH 下的萌发效率 | 第48页 |
| ·clpP 基因缺失在盐刺激下对菌株生长的影响 | 第48-49页 |
| ·clpP 基因缺失在碱刺激下对菌株生长的影响 | 第49-50页 |
| ·Bt 碱刺激下基因表达谱分析 | 第50-58页 |
| ·RT-PCR 确定碱刺激条件 | 第50页 |
| ·提取 RNA 的鉴定 | 第50-52页 |
| ·芯片杂交及结果扫描 | 第52-53页 |
| ·基因表达谱数据分析 | 第53-58页 |
| ·lytS 基因功能分析 | 第58-67页 |
| ·lrgAB 基因结构分析 | 第58-59页 |
| ·lytS 基因缺失片段的构建与鉴定 | 第59-61页 |
| ·lytS 基因缺失质粒的构建与鉴定 | 第61页 |
| ·lytS 基因缺失突变株的获得与验证 | 第61-62页 |
| ·lacZ 融合分析 lrgAB 基因的转录活性 | 第62-64页 |
| ·RealTime 分析碱刺激下转录情况 | 第64页 |
| ·lytS 基因缺失突变株的菌落形态分析 | 第64-65页 |
| ·lytS 基因缺失对芽胞形成率的影响 | 第65页 |
| ·菌株的自溶性分析 | 第65-66页 |
| ·细胞外蛋白分析 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附录 | 第79-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第80页 |
