| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| ·免疫荧光技术简介 | 第11-15页 |
| ·技术原理 | 第11-12页 |
| ·常用的荧光色素 | 第12-14页 |
| ·技术特点 | 第14-15页 |
| ·免疫荧光技术分类以及在寄生虫检测中的应用 | 第15-17页 |
| ·间接免疫荧光技术 | 第15-16页 |
| ·直接免疫荧光技术 | 第16页 |
| ·时间分辨荧光免疫分析法 | 第16-17页 |
| ·补体法 | 第17页 |
| ·免疫荧光法的限制与前景 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 研究一 派琴虫细胞壁蛋白基因CB5D4的克隆与鉴定 | 第19-27页 |
| ·材料与方法 | 第19-24页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-24页 |
| ·蛤仔基因组DNA的提取 | 第20页 |
| ·普通PCR扩增CB5D4基因引物的设计 | 第20-21页 |
| ·PCR反应体系及条件 | 第21页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第21-22页 |
| ·重组质粒CB5D4-pMD19-Tsimple的连接 | 第22页 |
| ·重组质粒CB5D4-pMD19-Tsimple的转化 | 第22-23页 |
| ·重组质粒CB5D4-pMD19-Tsimple的PCR鉴定 | 第23页 |
| ·重组质粒CB5D4-pMD19-Tsimple.的提取 | 第23页 |
| ·重组质粒CB5D4-pMD19-Tsimple双酶切鉴定 | 第23-24页 |
| ·测序鉴定 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-25页 |
| ·派琴虫CB5D4基因的PCR扩增 | 第24页 |
| ·重组质粒CB5D4-pMD19-Tsimple的构建 | 第24-25页 |
| ·序列测定与分析 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| 3 研究二 派琴虫CB5D4蛋白的表达与纯化 | 第27-36页 |
| ·材料与方法 | 第27-31页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·重组质粒pET32a-CB5D4的构建 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pET32a-CB5D4的转化 | 第29页 |
| ·重组质粒pET32a-CB5D4的PCR鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒pET32a-CB5D4的双酶切鉴定 | 第29页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第29页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第29-30页 |
| ·融合蛋白CB5D4-pET32a的Western Blot分析 | 第30页 |
| ·融合蛋白CB5D4-pET32a的可溶性分析 | 第30-31页 |
| ·融合蛋白CB5D4-pET32a的纯化 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-34页 |
| ·重组质粒CB5D4-pET32a的构建 | 第31页 |
| ·重组菌诱导表达条件的优化 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白的Western Blot分析 | 第32-33页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析及纯化 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 4 研究三派琴虫CB5D4单克隆抗体的制备及免疫原性分析 | 第36-44页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-39页 |
| ·动物免疫 | 第36-37页 |
| ·抗体效价检测——间接酶联免疫吸附法(ELISA) | 第37页 |
| ·骨髓瘤细胞的复苏和培养 | 第37-38页 |
| ·细胞融合 | 第38页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第38页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的检测 | 第38页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株腹水制备及腹水效价检测 | 第38页 |
| ·腹水纯化及抗体效价检测 | 第38-39页 |
| ·抗体交叉反应检测 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·免疫动物血清效价检测结果 | 第39页 |
| ·细胞融合筛选检测结果 | 第39页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆筛选结果 | 第39页 |
| ·阳性杂交瘤细胞鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·腹水制备及效价检测结果 | 第40-41页 |
| ·抗体效价与纯度检测结果 | 第41-42页 |
| ·抗体交叉反应检测结果 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 5 研究四派琴虫CB5D4单克隆抗体直接免疫荧光检测方法的建立 | 第44-50页 |
| ·材料与方法 | 第44-47页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-47页 |
| ·抗体标记FITC(Marsshall法) | 第45页 |
| ·阳性细胞免疫荧光检测 | 第45页 |
| ·反应体系中阳性细胞量的优化 | 第45页 |
| ·反应体系中固定剂加入与否的对比检测 | 第45-46页 |
| ·敏感性试验 | 第46页 |
| ·模拟样品蛤仔石蜡切片的制备及检测 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-48页 |
| ·FTM培养的阳性细胞免疫荧光检测结果 | 第47页 |
| ·派琴虫感染蛤仔石蜡切片免疫荧光检测结果 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
