| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 縮略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-22页 |
| 1 病原学 | 第12-13页 |
| ·流行现状及危害 | 第12页 |
| ·培养和生化特性 | 第12-13页 |
| ·血清型 | 第13页 |
| 2 GYRB基因研究进展 | 第13-16页 |
| ·GYRB基因在细菌系统发育树的应用研究 | 第13-15页 |
| ·GYRB基因在细菌鉴定的应用 | 第15-16页 |
| ·gyrB基因在定量PCR方法中的应用 | 第15页 |
| ·gyrB基因在多重PCR鉴定中应用 | 第15页 |
| ·gyrB基因在RFLP-PCR鉴定中应用 | 第15页 |
| ·gyrB基因在DGGE技术的应用 | 第15-16页 |
| ·gyrB基因在其他领域中应用 | 第16页 |
| 3 鸭疫里默氏杆菌的诊断方法 | 第16-20页 |
| ·细菌分离鉴定法 | 第16-17页 |
| ·免疫学诊断方法 | 第17页 |
| ·RFLP分析方法 | 第17-18页 |
| ·PCR检测方法 | 第18-20页 |
| ·普通PCR检测方法应用 | 第18页 |
| ·重复序列PCR基因指纹分析(REP-PCR)应用 | 第18-19页 |
| ·肠杆菌基因间重复共有序列(ERIC-PCR)应用 | 第19页 |
| ·荧光定量PCR(RQ-PCR)应用 | 第19-20页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)方法应用 | 第20页 |
| 4 选题背景和意义 | 第20-22页 |
| 第一章 基于GYRB基因特异性建立检测鸭疫里默氏杆菌PCR方法 | 第22-28页 |
| 1 试验材料 | 第22页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·仪器 | 第22页 |
| ·疑似RA的分离菌株 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-24页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| ·模板DNA的制备 | 第23页 |
| ·DNA模板方法的比较 | 第23页 |
| ·PCR扩增体系及程序 | 第23页 |
| ·PCR特异性 | 第23-24页 |
| ·PCR敏感性 | 第24页 |
| ·PCR产物测序 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-27页 |
| ·PCR扩增产物的鉴定 | 第24页 |
| ·DNA模板制备方法的比较 | 第24-25页 |
| ·PCR特异性 | 第25页 |
| ·PCR敏感性 | 第25-26页 |
| ·PCR法用于分离菌株的检测结果 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 第二章 基于GYRB基因特异性建立检测鸭疫里默氏杆菌环介导等温扩增(LAMP)技术 | 第28-38页 |
| 1 试验材料 | 第28页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-31页 |
| ·LAMP引物设计 | 第28-29页 |
| ·细菌培养 | 第29-30页 |
| ·细菌平板计数 | 第30页 |
| ·细菌DNA模板的制备 | 第30页 |
| ·LAMP反映体系的优化 | 第30页 |
| ·LAMP产物的可视性观察 | 第30-31页 |
| ·LAMP方法敏感性 | 第31页 |
| ·LAMP方法特异性 | 第31页 |
| ·LAMP产物的酶切鉴定分析 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-36页 |
| ·LAMP反映体系的优化结果 | 第31-32页 |
| ·LAMP产物的可视性观察 | 第32-33页 |
| ·LAMP方法的敏感性 | 第33-34页 |
| ·凝胶电泳检测判断LAMP检测方法的敏感性 | 第33-34页 |
| ·可视性观察判断LAMP检测方法的敏感性 | 第34页 |
| ·LAMP方法的特异性 | 第34-35页 |
| ·LAMP产物酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 4 结论 | 第36-38页 |
| 第三章 基于GYRB基因特异性建立鸭疫里默氏杆菌实时荧光定量PCR方法 | 第38-49页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| ·菌株 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·仪器 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-41页 |
| ·细菌培养 | 第38页 |
| ·模板DNA的制备 | 第38-39页 |
| ·常规PCR引物的设计与合成 | 第39页 |
| ·常规PCR反应的建立与优化 | 第39页 |
| ·常规PCR扩增产物的DNA测序 | 第39页 |
| ·FQ-PCR引物的设计与合成 | 第39-40页 |
| ·重组质粒标准品的制备 | 第40页 |
| ·荧光定量PCR反应条件的优化 | 第40页 |
| ·荧光定量PCR反应体系的优化 | 第40页 |
| ·标准曲线的建立 | 第40页 |
| ·荧光定量PCR检测的方法评价 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-47页 |
| ·普通PCR扩增结果 | 第41页 |
| ·FQ-PCR引物设计 | 第41-42页 |
| ·FQ-PCR反应条件的优化 | 第42-43页 |
| ·FQ-PCR标准曲线的建立 | 第43-45页 |
| ·FQ-PCR产物的溶解曲线分析 | 第45页 |
| ·FQ-PCR灵敏性 | 第45-46页 |
| ·FQ-PCR特异性 | 第46-47页 |
| ·FQ-PCR方法的重复性 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 PCR,FQ-PCR和LAMP检测鸭疫默氏杆菌的比较 | 第49-54页 |
| 1 材料 | 第49页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·动物 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·仪器 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-50页 |
| ·细菌培养和计数 | 第49-50页 |
| ·DNA的制备 | 第50页 |
| ·菌液DNA的提取 | 第50页 |
| ·病料样品DNA的提取 | 第50页 |
| ·人工感染死亡鸭的细菌分离、PCR、FQ-PCR和LAMP检测 | 第50页 |
| ·可疑感染鸭肝脏病料的细分离、PCR、FQ-PCR和LAMP检测 | 第50页 |
| ·临床健康鸭群的带菌PCR、FQ-PCR和LAMP检测 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| ·人工感染的雏鸭细菌分离和PCR、FQ-PCR、LAMP检测结果 | 第50-51页 |
| ·可疑感染鸭肝脏病料的细菌分离和PCR、FQ-PCR、LAMP检测结果 | 第51页 |
| ·临床健康鸭群的带菌PCR,FQ-PCR和LAMP检测结果 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
