一种（+）γ-内酰胺酶的表达纯化与酶学性质的初步研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| ·手性及手性药物 | 第11-12页 |
| ·手性及手性药物的定义 | 第11-12页 |
| ·手性药物的作用机理 | 第12页 |
| ·手性药物的合成方法 | 第12-14页 |
| ·化学合成法 | 第12-13页 |
| ·生物合成法 | 第13页 |
| ·生物合成法的特点 | 第13-14页 |
| ·生物手性化技术的应用与展望 | 第14-15页 |
| ·(-)γ-内酰胺及其应用 | 第15-18页 |
| ·阿巴卡韦简介 | 第16页 |
| ·阿巴卡韦中间体的合成 | 第16-18页 |
| ·(±)γ-内酰胺的拆分 | 第18页 |
| ·基因的克隆与表达 | 第18-19页 |
| ·基因克隆策略 | 第18-19页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第19页 |
| ·蛋白分离纯化 | 第19-22页 |
| ·离子交换层析 | 第19-21页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第21页 |
| ·金属螯合层析 | 第21-22页 |
| ·课题研究的意义及研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 (+)γ-内酰胺酶的表达纯化 | 第23-37页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第23-25页 |
| ·主要试剂及药品 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-31页 |
| ·γ-内酰胺酶基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·引物 | 第26页 |
| ·模版 | 第26页 |
| ·PCR反应体系 | 第26页 |
| ·重组(+)γ-内酰胺酶基因的表达 | 第26-29页 |
| ·重组(+)γ-内酰胺酶分离纯化 | 第29-30页 |
| ·酶活检测 | 第30-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-35页 |
| ·γ-内酰胺酶基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·重组(+)γ-内酰胺酶的表达与纯化 | 第32-35页 |
| ·酶活检测 | 第35页 |
| ·本章小结 | 第35-37页 |
| 第三章 重组(+)γ-内酰胺酶酶学性质的研究 | 第37-53页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第37-39页 |
| ·主要试剂及药品 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·相关溶剂配制 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·重组(+)γ-内酰胺酶酶活的定义 | 第39页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第39-40页 |
| ·酶对底物的选择性水解 | 第40页 |
| ·酶的最适温度测定与耐热性研究 | 第40页 |
| ·酶的最适pH测定与pH耐受研究 | 第40页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第40-41页 |
| ·金属螯合剂、蛋白保护剂对酶活力的影响 | 第41页 |
| ·酶的米氏常数Km及Vmax的测定 | 第41-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-51页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第42-43页 |
| ·酶对底物的选择性水解 | 第43-44页 |
| ·酶的最适温度测定与耐热性研究 | 第44-46页 |
| ·酶的最适PH测定与PH耐受研究 | 第46-48页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第48-49页 |
| ·金属螯合剂、蛋白保护剂对酶活力的影响 | 第49-50页 |
| ·酶的米氏常数Km及Vmax的测定 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-53页 |
| 第四章 重组(+)γ-内酰胺酶结构信息的初步研究 | 第53-59页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第53-54页 |
| ·主要试剂及药品 | 第53-54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-55页 |
| ·重组(+)γ-内酰胺酶序列比对 | 第54页 |
| ·氧气对酶活力的影响 | 第54-55页 |
| ·电子传递辅因子对酶活力的影响 | 第55页 |
| ·铁氧还蛋白结构对酶活的影响 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-57页 |
| ·重组(+)γ-内酰胺酶序列比对 | 第55-56页 |
| ·氧气对酶活力的影响 | 第56页 |
| ·电子传递辅因子对酶活力的影响 | 第56-57页 |
| ·铁氧还蛋白结构对酶活的影响 | 第57页 |
| ·本章小结 | 第57-59页 |
| 第五章 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第69-71页 |
| 作者简介 | 第71-72页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第72-73页 |
