| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-27页 |
| 1 禽流感的概述 | 第9页 |
| 2 禽流感病毒的概述 | 第9-20页 |
| 3 流感病毒与宿主的免疫反应 | 第20-21页 |
| 4 A 型流感病毒反向遗传操作技术 | 第21-25页 |
| 5.本论文拟解决的问题 | 第25页 |
| 6.本文研究的意义 | 第25-27页 |
| 第二部分 研究报告 | 第27-61页 |
| 试验一 A/Duck/Guangxi/27/2003(H5N1)禽流感病毒全基因的克隆及测序 | 第27-37页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| ·毒株及实验动物 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·溶液配制 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-34页 |
| ·病毒的增殖 | 第29页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·病毒基因组的反转录 | 第30页 |
| ·反转录产物的PCR 反应 | 第30页 |
| ·PCR 产物的回收与处理 | 第30页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第30-32页 |
| ·质粒 DNA 鉴定 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-35页 |
| ·全基因 RT-PCR 扩增结果 | 第34页 |
| ·全基因的克隆与鉴定 | 第34页 |
| ·质粒 DNA 的 PCR 鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·cDNA 的序列测定 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 试验二 A/Duck/Guangxi/27/2003(H5N1)禽流感病毒的感染性克隆建立及重组亲本病毒的救获 | 第37-43页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| ·病毒分离株及实验动物 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·引物 | 第37-38页 |
| ·PBD 载体 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-40页 |
| ·病毒 RNA 提取、反转录与 PCR | 第38页 |
| ·感染性克隆的建立 | 第38-39页 |
| ·病毒救获 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-41页 |
| ·阳性PBD 克隆质粒电泳鉴定结果 | 第40页 |
| ·阳性 pBD 克隆质粒酶切产物电泳鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·救获重组病毒(RDK27)的检测与鉴定结果 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 试验三 A/Duck/Guangxi/27/2003(H5N1)禽流感病毒和重组亲本病毒对小鼠的致病性试验 | 第43-51页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| ·病毒 | 第43页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-44页 |
| ·两株病毒EID_(50)的测定 | 第43页 |
| ·病毒对鸡的毒力测定（IVPI） | 第43页 |
| ·病毒对小鼠的致病性试验 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-50页 |
| ·病毒EID_(50) 的测定结果 | 第44页 |
| ·病毒对鸡的毒力测定结果 | 第44-45页 |
| ·病毒对小鼠的致病性试验结果 | 第45-50页 |
| ·感染病毒后小鼠死亡情况 | 第45页 |
| ·10~6 EID_(50) 病毒感染后小鼠的体重变化情况 | 第45-47页 |
| ·病毒感染小鼠的组织嗜性结果 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 试验四 A/Duck/Guangxi/27/2003(H5N1)禽流感病毒 NS1 蛋白 42 位氨基酸改变后对小鼠致病性影响的试验 | 第51-61页 |
| 1 材料 | 第51页 |
| ·病毒株及实验动物 | 第51页 |
| ·pBD 载体 | 第51页 |
| ·引物 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-53页 |
| ·NS 基因的定点突变 | 第51-52页 |
| ·重组突变质粒的构建 | 第52页 |
| ·阳性重组突变质粒的鉴定 | 第52页 |
| ·NS 基因突变病毒的救获 | 第52页 |
| ·救获的重组突变病毒(简称为 RDK27NS1S42G)的鉴定 | 第52页 |
| ·重组突变病毒对小鼠的致病性试验 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-59页 |
| ·NS 突变基因后 RT-PCR 结果 | 第53页 |
| ·NS 重组突变质粒电泳鉴定结果 | 第53-54页 |
| ·NS 重组突变质粒的序列测定结果 | 第54页 |
| ·救获的重组突变病毒(简称为 RDK27NS1S42G)的鉴定结果 | 第54页 |
| ·重组突变病毒对小鼠的致病性试验结果 | 第54-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
