| 第一部分、组合生物合成综述 | 第1-36页 |
| 一、概述 | 第6-7页 |
| (一)、定义 | 第6页 |
| (二)、理论基础 | 第6页 |
| (三)、主要应用范围 | 第6-7页 |
| 二、聚酮合成酶(PKS)的分子生物学 | 第7-14页 |
| (一)、PKS的催化机理 | 第7-8页 |
| (二)、Ⅱ型PKS的分子生物学 | 第8-9页 |
| (三)、以eryA为代表的Ⅰ型PKS的分子生物学 | 第9-12页 |
| 1.ryA PKS基因簇结构 | 第9-10页 |
| 2.eryA PKS催化6dEB生物合成的简要过程 | 第10-11页 |
| 3.Ⅰ型PKS的多样性 | 第11-12页 |
| ·、催化方面的多样性 | 第11页 |
| ·起始单位的选择 | 第11页 |
| ·、延伸单位的选择 | 第11页 |
| ·、翻译后修饰 | 第11页 |
| ·、Ⅰ型PKS的异常催化方式—stuttering | 第11页 |
| ·、Ⅰ型PKS基因结构方面的多样性 | 第11页 |
| ·、PKS代谢旁路的多样性 | 第11-12页 |
| (四)、Ⅰ型PKS特征基因功能 | 第12-14页 |
| 1.LD、KSQ | 第12页 |
| 2.AT | 第12-13页 |
| 3、TE | 第13-14页 |
| ·TE区功能研究 | 第13页 |
| ·TEⅡ区功能研究 | 第13-14页 |
| 三、Ⅰ型PKS基因簇的克隆 | 第14-15页 |
| 四、组合生物合成的表达系统 | 第15-16页 |
| (一)、CH999／pRM5(K4／pRM5)宿主—载体系统 | 第15-16页 |
| (二)、S.erythraea／pCJR24宿主—载体系统 | 第16页 |
| (三)、非放线菌系统 | 第16页 |
| 五、组合生物合成的基础、方法及运用 | 第16-25页 |
| (一)、PKS的分子催化、识别 | 第16-18页 |
| 1.酶对底物宽容性 | 第17页 |
| 2.活性位点间信息传递 | 第17页 |
| 3.立体化学控制 | 第17-18页 |
| (二)、组合生物合成的方法学 | 第18-23页 |
| 1.染色体水平的同源重组(homologous recombination) | 第18-19页 |
| 2.链长的改变(change of chain length) | 第19页 |
| 3.起始单位的改变(change of start units) | 第19-20页 |
| 4.获得功能(gain of function) | 第20-21页 |
| 5.前体引导的生物合成(precursor-directed biosynthesis) | 第21页 |
| 6.组件置换(module swap) | 第21-22页 |
| 7.单质粒转化 | 第22页 |
| 8.三质粒转化 | 第22-23页 |
| (三)、运用组合生物合成产生新的先导化合物和化合物库 | 第23-25页 |
| 1.Ⅱ型PKS基因簇的组合生物合成 | 第23页 |
| 2.合理设计产生新的先导化合物 | 第23-24页 |
| 3.组合生物合成的巨大成就—epothilone PKS基因簇的克隆和异源宿主表达 | 第24-25页 |
| 六、糖的组合生物合成 | 第25-26页 |
| (一)、组合生物合成产生含杂合糖苷 | 第25页 |
| (二)、S.erythraea中形成杂合糖苷 | 第25-26页 |
| 七、一个PKS负责两类抗生素产生—pikromycin PKS | 第26-28页 |
| (一)、PikA PKS的分子生物学 | 第26-27页 |
| (二)、PikAⅣ调节机理 | 第27-28页 |
| 八、非核糖体肽合成酶 | 第28-29页 |
| (一)、NRPS作用机制 | 第28页 |
| (二)、NRPS与PKS的异同 | 第28-29页 |
| 九、E.coli(大肠杆菌)系统中表达DEBS产生6dEB | 第29-30页 |
| 十、组合生物合成的发展趋势 | 第30页 |
| 十一、展望 | 第30-31页 |
| 十二、参考文献 | 第31-36页 |
| 第二部分、抗病毒抗生素Geldanamycin生物合成基因簇的克隆 | 第36-49页 |
| 1.材料 | 第36页 |
| 2.仪器 | 第36-37页 |
| 3.培养基 | 第37页 |
| 4.缓冲液 | 第37-39页 |
| 5.实验方法 | 第39-43页 |
| 6.结果与讨论 | 第43-49页 |
| ·S.hygroscopicus 17997基因文库的构建 | 第43-44页 |
| ·S.hygroscopicus 17997基因组中部分PKS DNA片段的获得 | 第44-46页 |
| ·含PKS DNA片段的粘粒的获得 | 第46-47页 |
| ·基因阻断对抗生素生物合成基因的证明 | 第47页 |
| ·AHBA(3-氨基-5-羟基苯甲酸)生物合成基因簇的克隆 | 第47-49页 |
| 第三部分、黑暗链霉菌S.tenebrarius H6糖生物合成基因簇的克隆 | 第49-54页 |
| 1.dTDP-葡萄糖-4，6-脱水酶基因的克隆 | 第49-50页 |
| 2.糖生物合成基因簇的克隆 | 第50-54页 |
| 第四部分、typeⅡ PKS基因组合生物合成研究 | 第54-59页 |
| 1.typeⅡ PKS DNA片段的克隆 | 第54-57页 |
| 2.活性产物的获得 | 第57-58页 |
| 3.结论和进一步的工作安排 | 第58-59页 |
| 第五部分、参考文献 | 第59-61页 |
| 第六部分、致谢 | 第61页 |
