摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-14页 |
前言 | 第14-30页 |
1. 新城疫病毒研究进展 | 第14-20页 |
·新城疫概述 | 第14-15页 |
·新城疫病毒分子生物学特点 | 第15-17页 |
·NDV 的复制 | 第17-18页 |
·NDV 的防治 | 第18-20页 |
2 RNAI 及其抗病毒研究进展 | 第20-29页 |
·RNAi 现象的发现 | 第20页 |
·RNAi 的分子机制 | 第20-21页 |
·miRNA | 第21-23页 |
·哺乳动物特殊的RNAi 现象 | 第23页 |
·RNAi 的优点 | 第23页 |
·siRNA 的制备 | 第23-25页 |
·RNAi 抗病毒作用 | 第25-28页 |
·RNAi 的局限性 | 第28-29页 |
·结论 | 第29页 |
3 本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
实验一:载体表达SHRNA 抑制新城疫病毒复制 | 第30-44页 |
1 材料 | 第30-31页 |
·病毒、载体、菌株和SPF 鸡胚 | 第30页 |
·主要试剂 | 第30-31页 |
·主要仪器设备 | 第31页 |
2 方法 | 第31-34页 |
·shRNA 设计与表达载体的构建 | 第31-32页 |
·CEF 细胞的制备和培养 | 第32页 |
·转染 | 第32-33页 |
·病毒接种 | 第33页 |
·Real-time PCR | 第33-34页 |
·间接免疫荧光 | 第34页 |
3 结果 | 第34-42页 |
·RNAi 靶位点的选择和表达载体的构建 | 第34页 |
·Real-time PCR 标准曲线的建立 | 第34页 |
·L 基因(功能区)特异性的shRNA 对NDV 的抑制作用 | 第34-37页 |
·L 基因保守区特异性的shRNA 对NDV 的抑制作用 | 第37-39页 |
·P 基因特异性的shRNA 对NDV 的抑制作用 | 第39-40页 |
·NP 基因特异性的shRNA 对NDV 的抑制作用 | 第40-42页 |
4 讨论 | 第42-44页 |
实验二:MIRNA 表达载体的构建及其在鸡胚中对NDV 的抑制作用 | 第44-54页 |
1 材料 | 第44-45页 |
·病毒、载体、菌株和SPF 鸡胚 | 第44页 |
·主要试剂 | 第44页 |
·主要仪器设备 | 第44-45页 |
2 方法 | 第45-49页 |
·miRNA 设计与表达载体的构建 | 第45-48页 |
·鸡胚的转染 | 第48页 |
·miRNA 对NDV 抑制作用的检测 | 第48-49页 |
3 结果 | 第49-52页 |
·miRNA 的设计、合成 | 第49页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第49页 |
·重组质粒的测序鉴定 | 第49-51页 |
·miRNA 对NDV 抑制作用的检测 | 第51-52页 |
4 讨论 | 第52-54页 |
结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-61页 |
致谢 | 第61-62页 |
作者简介 | 第62页 |