| 缩略语 | 第1-10页 |
| 前言 | 第10-15页 |
| 参考文献 | 第13-15页 |
| 摘要 | 第15-17页 |
| Abstract | 第17-19页 |
| 第一部分 人皮肤黑素瘤中microRNA表达的研究 | 第19-65页 |
| 第一节 实验材料、试剂及仪器 | 第19-24页 |
| 一、临床标本 | 第19-22页 |
| 二、主要试剂及溶液的配制 | 第22页 |
| 三、主要仪器及软件 | 第22-23页 |
| 四、人microRNA芯片V1.0 | 第23-24页 |
| 第二节 实验方法 | 第24-29页 |
| 一、miRNA的提取 | 第24-25页 |
| 二、miRNA样品标记 | 第25页 |
| 三、miRNA芯片杂交 | 第25-26页 |
| 四、miRNA芯片清洗 | 第26页 |
| 五、数据分析 | 第26-28页 |
| 六、RT-qPCR验证差异表达的miRNA | 第28-29页 |
| 第三节 结果 | 第29-58页 |
| 一、总RNA的质量检测 | 第29页 |
| 二、总RNA的电泳图 | 第29-30页 |
| 三、芯片杂交图像 | 第30-32页 |
| 四、二倍以上差异表达的miRNA | 第32-50页 |
| 五、芯片检出率 | 第50页 |
| 六、散点图 | 第50-53页 |
| 七、聚类分析 | 第53-57页 |
| 八、芯片筛选的共同差异表达miRNA | 第57页 |
| 九、RT-qPCR对芯片结果的验证 | 第57-58页 |
| 十、经RT-qPCR验证的共同差异表达miRNA | 第58页 |
| 第四节 讨论 | 第58-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 第二部分 microRNA-21在人黑素瘤细胞系中的表达及其功能的初步研究 | 第65-82页 |
| 第一节 实验试剂、材料及仪器 | 第65-67页 |
| 一、主要试剂及溶液的配制 | 第65-66页 |
| 二、主要仪器及耗材 | 第66-67页 |
| 第二节 实验方法 | 第67-70页 |
| 一、miRNA的提取 | 第67页 |
| 二、miRNA-21定量检测 | 第67-68页 |
| 三、细胞转染 | 第68页 |
| 四、细胞增殖试验 | 第68-69页 |
| 五、细胞转染效率 | 第69页 |
| 六、流式细胞术检测凋亡细胞DNA含量 | 第69页 |
| 七、流式细胞术检测A375细胞凋亡 | 第69-70页 |
| 第三节 结果 | 第70-77页 |
| 一、细胞总RNA的提取与质量检测 | 第70-71页 |
| 二、miRNA-21在细胞中的表达 | 第71-72页 |
| 三、细胞转染效率 | 第72-73页 |
| 四、细胞增殖的变化 | 第73-74页 |
| 五、细胞周期的变化 | 第74-75页 |
| 六、细胞凋亡的变化 | 第75-77页 |
| 第四节 讨论 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 第三部分 microRNA-21影响人黑素瘤细胞活性的机制研究 | 第82-94页 |
| 第一节 实验试剂、材料及仪器 | 第82-84页 |
| 一、主要试剂及溶液的配制 | 第82-83页 |
| 二、主要仪器 | 第83-84页 |
| 第二节 实验方法 | 第84-87页 |
| 一、细胞培养与转染 | 第84页 |
| 二、提取A375细胞总RNA | 第84-85页 |
| 三、半定量逆转录PCR(RT-PCR) | 第85-87页 |
| 第三节 结果 | 第87-90页 |
| 一、细胞转染效率 | 第87页 |
| 二、A375细胞总RNA的提取与质量检测 | 第87-88页 |
| 三、miRNA-21 inhibitor对A375细胞中BRAF与p27基因mRNA表达的影响 | 第88-90页 |
| 第四节 讨论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 全文小结 | 第94-96页 |
| 一、创新与结论 | 第94-95页 |
| 二、不足与展望 | 第95-96页 |
| 论文相关综述 | 第96-102页 |
| 研究生就读期间发表论文及参加学术活动情况 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-105页 |
