| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 中文文摘 | 第6-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-26页 |
| ·课题背景 | 第12-13页 |
| ·A组β—溶血性链球菌概况及研究现状 | 第13-17页 |
| ·链球菌概况 | 第13页 |
| ·GAS生物学性状 | 第13-14页 |
| ·致病物质及其研究进展 | 第14-16页 |
| ·微生物学检查法 | 第16页 |
| ·疫苗研制现状及前景 | 第16-17页 |
| ·DNase B研究进展及意义 | 第17-22页 |
| ·链球菌DNases的研究历史回顾 | 第17-19页 |
| ·DNase B的生物学特征 | 第19页 |
| ·Anti-DNase B抗体在GAS感染检测中的意义及检测试剂研制现状 | 第19-22页 |
| ·简述亲和层析 | 第22-25页 |
| ·亲和层析的原理 | 第22-23页 |
| ·亲和层析的应用 | 第23-24页 |
| ·亲和层析的优缺点 | 第24-25页 |
| ·本课题的研究意义及前景 | 第25-26页 |
| 第2章 DNase B基因的亚克隆及原核表达载体构建 | 第26-38页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·材料与方法 | 第26-33页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-37页 |
| ·DNase B基因截短片段的扩增 | 第33-34页 |
| ·截短DNase B基因片段的TA克隆 | 第34页 |
| ·重组克隆质粒的菌落PCR检测、酶切鉴定及测序 | 第34-35页 |
| ·表达质粒和目的基因片段的双酶切及连接 | 第35-36页 |
| ·重组表达质粒的菌落PCR及酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·结论 | 第37-38页 |
| 第3章 截短DNase B蛋白的表达和鉴定 | 第38-46页 |
| ·前言 | 第38页 |
| ·材料与方法 | 第38-43页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-44页 |
| ·截短DNase B基因片段的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·Western blotting | 第44页 |
| ·结论 | 第44-46页 |
| 第4章 DNase B基因的突变修复及原核表达载体的构建 | 第46-58页 |
| ·前言 | 第46页 |
| ·材料与方法 | 第46页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·方法 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-56页 |
| ·DNase B基因片段的定点突变 | 第46-50页 |
| ·突变DNase B基因的TA克隆 | 第50页 |
| ·重组克隆质粒的菌落PCR检测、酶切鉴定及测序 | 第50-51页 |
| ·测序结果分析及修复策略 | 第51-52页 |
| ·修复后新获得克隆质粒的菌落PCR及酶切鉴定及测序 | 第52页 |
| ·表达质粒及新克隆质粒的双酶切及连接 | 第52-53页 |
| ·重组表达质粒的菌落PCR及酶切鉴定 | 第53-56页 |
| ·结论 | 第56-58页 |
| 第5章 DNase B蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第58-66页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-62页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-65页 |
| ·筛选表达菌株及目的蛋白的表达鉴定 | 第62-63页 |
| ·亲和层析 | 第63-65页 |
| ·BCA法定量检测目的蛋白浓度 | 第65页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| 第6章 Western blotting、ELISA及致敏胶乳检测 | 第66-74页 |
| ·前言 | 第66页 |
| ·材料与方法 | 第66-70页 |
| ·材料 | 第66-68页 |
| ·方法 | 第68-70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-73页 |
| ·Western blotting | 第70-71页 |
| ·ELISA | 第71-72页 |
| ·致敏胶乳制备检测 | 第72-73页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| 第7章 DNase B蛋白表达发酵条件的优化 | 第74-88页 |
| ·前言 | 第74页 |
| ·材料与方法 | 第74-76页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·方法 | 第75-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-86页 |
| ·单因素优化发酵条件 | 第76-80页 |
| ·正交优化实验 | 第80-84页 |
| ·摇瓶发酵验证实验结果 | 第84-85页 |
| ·上罐发酵验证 | 第85-86页 |
| ·结论 | 第86-88页 |
| 总结与展望 | 第88-92页 |
| 总结 | 第88-91页 |
| 展望 | 第91-92页 |
| 附录 | 第92-96页 |
| 参考文献 | 第96-103页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 个人简历 | 第105-106页 |
