| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-49页 |
| 1 课题提出 | 第16-17页 |
| 2 前人研究进展 | 第17-48页 |
| ·芽变研究进展 | 第17-28页 |
| ·芽变基础 | 第17-20页 |
| ·芽变的概念与特点 | 第17-18页 |
| ·芽变的细胞学和分子生物学基础 | 第18-19页 |
| ·芽变的遗传学基础 | 第19-20页 |
| ·芽变的研究和应用价值 | 第20-21页 |
| ·芽变在科学研究中的价值 | 第20页 |
| ·芽变在果树育种中的应用 | 第20-21页 |
| ·芽变机理研究策略 | 第21-24页 |
| ·分子标记在芽变研究中的应用 | 第21-22页 |
| ·差异显示技术 | 第22页 |
| ·基因全长克隆技术 | 第22-24页 |
| ·果树芽变的细胞和分子机理研究进展 | 第24-27页 |
| ·染色体结构和数目变异 | 第24-25页 |
| ·反转录转座子插入 | 第25-26页 |
| ·DNA甲基化 | 第26页 |
| ·基因结构和表达差异 | 第26-27页 |
| ·柑橘红肉突变体的研究 | 第27-28页 |
| ·高等植物类胡萝卜素代谢研究进展 | 第28-37页 |
| ·高等植物类胡萝卜素的生物合成途径 | 第28-30页 |
| ·高等植物类胡萝卜素合成途径关键酶及其基因的研究进展 | 第30-33页 |
| ·高等植物类胡萝卜素生物合成与调控 | 第33-37页 |
| ·转录调控 | 第34-36页 |
| ·转录后调控 | 第36页 |
| ·类胡萝卜素储存调控 | 第36-37页 |
| ·柑橘果实有机酸代谢研究进展 | 第37-41页 |
| ·果实中有机酸的种类和含量变化 | 第37-38页 |
| ·有机酸的合成部位和贮藏场所 | 第38页 |
| ·果实中有机酸的合成代谢途径 | 第38-40页 |
| ·柠檬酸代谢分子生物学研究 | 第40-41页 |
| ·柑橘果实可溶性糖代谢研究进展 | 第41-45页 |
| ·果实中糖的种类和含量变化 | 第41-42页 |
| ·糖的运输 | 第42-43页 |
| ·韧皮部运输阶段 | 第42页 |
| ·糖分的后韧皮部运输阶段 | 第42-43页 |
| ·糖分进入果实细胞液泡 | 第43页 |
| ·糖代谢关键酶及其基因研究进展 | 第43-45页 |
| ·抑制差减杂交技术发展与应用 | 第45-46页 |
| ·基因芯片结合 SSH技术在植物研究上的应用 | 第46-48页 |
| ·基因芯片的原理及分类 | 第46-47页 |
| ·基因芯片结合 SSH技术在植物研究上的应用 | 第47-48页 |
| 3 本研究的目的与内容 | 第48-49页 |
| 材料与方法 | 第49-65页 |
| 1 实验材料 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-65页 |
| ·色素的HPLC测定 | 第49-50页 |
| ·类胡萝卜素的提取及总量测定 | 第49页 |
| ·类胡萝卜素皂化和 HPLC检测条件 | 第49-50页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第50页 |
| ·类胡萝卜素定性和定量分析 | 第50页 |
| ·可溶性糖和有机酸的GC测定 | 第50-52页 |
| ·可溶性糖和有机酸的提取 | 第50-51页 |
| ·提取物的两步衍生化 | 第51页 |
| ·糖、酸的 GC分析条件 | 第51页 |
| ·主要糖、酸成分的定性 | 第51页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第51-52页 |
| ·最小检测限的测定 | 第52页 |
| ·研究方法的重复性和回收率 | 第52页 |
| ·酸代谢关键酶活性测定 | 第52-54页 |
| ·酶液的制备 | 第52-53页 |
| ·酶活测定方法 | 第53-54页 |
| ·RNA提取和mRNA分离 | 第54-56页 |
| ·RNA提取的试剂 | 第55页 |
| ·RNA提取的步骤 | 第55-56页 |
| ·mRNA分离 | 第56页 |
| ·差减cDNA文库构建 | 第56-60页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第56-59页 |
| ·双链cDNA合成与 RsaI酶切 | 第56-57页 |
| ·接头连接 | 第57-58页 |
| ·差减杂交 | 第58页 |
| ·两次 PCR选择性扩增 | 第58-59页 |
| ·差减效率检测 | 第59页 |
| ·差减文库生成 | 第59-60页 |
| ·差减文库的Microarray杂交筛选 | 第60-64页 |
| ·文库的扩增与纯化 | 第60-61页 |
| ·点样及后处理 | 第61-62页 |
| ·样品RNA提取 | 第62页 |
| ·对样品RNA进行荧光标记 | 第62-63页 |
| ·双链cDNA合成 | 第63页 |
| ·体外转录合成cRNA | 第63页 |
| ·随机引物反转录 | 第63页 |
| ·cDNA用 KLENOW酶标记 | 第63页 |
| ·芯片杂交与清洗 | 第63页 |
| ·芯片扫描 | 第63页 |
| ·芯片图像的采集与数据分析 | 第63-64页 |
| ·Real time RT-PCR分析 | 第64页 |
| ·生物信息学分析 | 第64-65页 |
| 结果与分析 | 第65-110页 |
| 1 果实 RNA提取方法的改进 | 第65-66页 |
| 2 ‘红暗柳’与‘暗柳’果实性状比较 | 第66-68页 |
| 3 ‘红暗柳’与‘暗柳’类胡萝卜素代谢分析 | 第68-75页 |
| ·有色层中两者类胡萝卜素含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第68-71页 |
| ·白皮层中两者类胡萝卜素含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第71-72页 |
| ·囊衣中两者类胡萝卜素含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第72-73页 |
| ·汁胞中两者类胡萝卜素含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第73-75页 |
| 4 ‘红暗柳’与‘暗柳’可溶性糖代谢分析 | 第75-82页 |
| ·有色层中两者可溶性糖含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第75-76页 |
| ·白皮层中两者可溶性糖含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第76-78页 |
| ·囊衣中两者可溶性糖含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第78-80页 |
| ·汁胞中两者可溶性糖含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第80-82页 |
| 5 ‘红暗柳’与‘暗柳’有机酸代谢分析 | 第82-93页 |
| ·有色层中两者有机酸含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第82-84页 |
| ·白皮层中两者有机酸含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第84-86页 |
| ·囊衣中两者有机酸含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第86-88页 |
| ·汁胞中两者有机酸含量和代谢途径中基因表达的差异 | 第88-90页 |
| ·汁胞中两者有机酸代谢关键酶活性测定 | 第90-93页 |
| 6 差减文库构建 | 第93-98页 |
| ·mRNA质量检测 | 第93页 |
| ·cDNA合成与酶切 | 第93-94页 |
| ·接头连接及连接效率检测 | 第94-95页 |
| ·文库插入片段的检测 | 第95-96页 |
| ·差减效率检测 | 第96-97页 |
| ·差减产物克隆 | 第97-98页 |
| 7 基因芯片筛选 | 第98-100页 |
| ·RNA质量检测 | 第98页 |
| ·杂交筛选 | 第98-100页 |
| 8 生物信息学分析 | 第100-110页 |
| ·EST分析 | 第100-105页 |
| ·‘红暗柳’果实性状形成过程中涉及的代谢途径 | 第105-107页 |
| ·与‘红暗柳’果实性状形成相关的候选调控基因 | 第107-108页 |
| ·芯片结果的Real-time验证 | 第108-110页 |
| 讨论 | 第110-119页 |
| 1 RNA提取方法的改进 | 第110页 |
| 2 ‘红暗柳’果实积累番茄红素机理探讨 | 第110-112页 |
| 3 ‘红暗柳’与‘暗柳’酸代谢差异机理探讨 | 第112-113页 |
| 4 ‘红暗柳’与‘暗柳’糖代谢差异机理探讨 | 第113-114页 |
| 5 与芽变性状相关的候选基因 | 第114-118页 |
| ·有机酸代谢途径 | 第115页 |
| ·脂代谢途径 | 第115-116页 |
| ·转运 | 第116页 |
| ·转录调控因子 | 第116-118页 |
| 6 未来研究的设想 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-151页 |
| 附录Ⅰ 柑橘不同组织 RNA高效快速提取 Protocol | 第151-152页 |
| 附录Ⅱ 柑橘果实类胡萝卜素提取 Protocol | 第152-153页 |
| 附录Ⅲ 柑橘果实类胡萝卜素 HPLC检测 Protocol | 第153-154页 |
| 附录Ⅳ Real-time PCR测定基因相对表达 Protocol | 第154-155页 |
| 附录Ⅴ Real-time PCR测定基因相对表达所用引物 | 第155-156页 |
| 附录Ⅵ 在‘红暗柳’与‘暗柳’果实中差异表达的克隆 | 第156-162页 |
| 附录Ⅶ 与‘红暗柳’果实性状形成相关的代谢途径 | 第162-165页 |
| 附录Ⅷ 攻读博士期间发表的论文 | 第165-166页 |
| 致谢 | 第166页 |
