| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 菊花主要病毒的主要特性 | 第12-16页 |
| ·菊花B病毒 | 第12-13页 |
| ·番茄不孕病毒 | 第13页 |
| ·菊花枯黄斑点类病毒 | 第13页 |
| ·菊花矮化类病毒 | 第13-14页 |
| ·黄瓜花叶病毒 | 第14页 |
| ·番茄斑驳萎蔫病毒 | 第14-15页 |
| ·烟草花叶病毒 | 第15-16页 |
| 2 病毒检测方法 | 第16-25页 |
| ·生物学检测 | 第16页 |
| ·血清学检测 | 第16-19页 |
| ·酶联免疫吸附测定 | 第16-17页 |
| ·点免疫结合测试技术 | 第17页 |
| ·直接组织斑免疫测定法 | 第17页 |
| ·电印迹免疫分析法 | 第17-18页 |
| ·伏安酶联免疫法 | 第18页 |
| ·快速免疫滤纸测定法 | 第18页 |
| ·胶体金免疫层析试验 | 第18页 |
| ·免疫毛细区带电泳 | 第18-19页 |
| ·分子生物学检测 | 第19-23页 |
| ·多聚酶链式反应 | 第19-20页 |
| ·多重RT-PCR | 第20页 |
| ·荧光实时PCR | 第20-21页 |
| ·核酸杂交技术 | 第21页 |
| ·双链RNA | 第21-22页 |
| ·基因芯片技术 | 第22-23页 |
| ·类病毒的检测方法研究 | 第23-25页 |
| ·生物学检测 | 第23页 |
| ·电泳方法 | 第23页 |
| ·RT-PCR | 第23-24页 |
| ·核酸杂交技术 | 第24页 |
| ·RT-PCR-ELISA方法检测类病毒 | 第24-25页 |
| ·菊花病毒检测技术研究 | 第25页 |
| 3 研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 菊花B病毒、番茄不孕病毒和菊花枯黄斑点类病毒的RT-PCR检测及番茄不孕病毒外壳蛋白的表达 | 第26-49页 |
| 1 材料 | 第26-29页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·酶以及试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·溶液配制 | 第27-29页 |
| ·培养基的配制 | 第27页 |
| ·一般溶液的配制 | 第27-28页 |
| ·实验试剂的配置 | 第28-29页 |
| ·质粒的提取 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE电泳试剂 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-37页 |
| ·菊花总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR扩增菊花病毒基因 | 第30-32页 |
| ·第一链的反转录 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增 | 第31页 |
| ·电泳检测及目的片段的回收 | 第31-32页 |
| ·目的片段的克隆及酶切鉴定 | 第32-34页 |
| ·目的片段与pGEM-T Vector连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备(CaCl2法) | 第32-33页 |
| ·转化 | 第33页 |
| ·重组质粒的提取(碱裂解法) | 第33-34页 |
| ·重组质粒验证 | 第34页 |
| ·RT-PCR检测CChMVd的灵敏度测试 | 第34-35页 |
| ·两重PCR及灵敏度测试 | 第35页 |
| ·利用RT-PCR的方法检测菊花脱毒植株 | 第35-36页 |
| ·菊花脱毒与非脱毒植株总RNA的提取与cDNA第一条链的合成 | 第35页 |
| ·RT-PCR检测脱毒效果 | 第35-36页 |
| ·TAV原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·pGEM-TAV和表达载体pET-30a(+)的酶切 | 第36页 |
| ·TAV CP基因和和表达载体pET-30a(+)的连接 | 第36-37页 |
| ·转化 | 第37页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第37页 |
| ·TAV CP蛋白的原核表达 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-47页 |
| ·菊花总RNA的检测 | 第37-38页 |
| ·菊花B病毒、番茄不孕病毒和菊花枯黄斑点类病毒基因的RT-PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·基因克隆、测序及序列分析 | 第39-43页 |
| ·RT-PCR检测CChMVd的灵敏度测试 | 第43-44页 |
| ·利用两重PCR同时检测菊花B病毒和番茄不孕病毒及检测灵敏度分析 | 第44页 |
| ·两重PCR检测菊花脱毒植株 | 第44-45页 |
| ·TAV CP的原核表达 | 第45-47页 |
| ·pGEM-TAV和原核表达载体pET-30a(+)酶切 | 第45页 |
| ·TAV CP基因和原核表达载体pET-30a(+)连接 | 第45-47页 |
| ·TAV CP蛋白的原核表达 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 匍匐小菊叶盘再生体系的建立 | 第49-55页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·生化试剂 | 第49页 |
| ·溶液配制 | 第49-50页 |
| ·主要仪器与设备 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-52页 |
| ·培养条件 | 第50-51页 |
| ·菊花无菌苗体系的建立 | 第51页 |
| ·6-BA和NAA不同浓度配比对菊花品种叶片外植体再生的影响 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-54页 |
| ·匍匐菊无菌苗体系 | 第52页 |
| ·匍匐小菊叶盘再生 | 第52-53页 |
| ·6-BA和NAA不同浓度配比对菊花品种叶片外植体再生的影响 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 攻读硕士学位期间己发表和待发表的论文 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
