| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一部分 克隆构建及表达检测 | 第13-25页 |
| 材料与方法 | 第13-20页 |
| 1.材料及来源 | 第13-14页 |
| ·细胞株、菌株及质粒 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·细胞培养试剂 | 第13-14页 |
| ·抗体 | 第14页 |
| ·大型仪器 | 第14页 |
| 2.实验方法 | 第14-20页 |
| ·GST-CUEDC2缺失突变表达载体的构建及鉴定 | 第14-17页 |
| ·GST-CUEDC2缺失突变表达载体的引物设计 | 第14-15页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第15-16页 |
| ·酶切PCR产物和载体 | 第16页 |
| ·连接 | 第16页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第16-17页 |
| ·质粒提取、酶切片段的鉴定 | 第17页 |
| ·Flag-CUEDC2各种缺失突变表达载体的构建及鉴定 | 第17页 |
| ·IKKβ缺失突变表达载体的构建及鉴定 | 第17-18页 |
| ·3×Flag-CUEDC2和3×Flag-PP1的构建 | 第18页 |
| ·细胞转染 | 第18页 |
| ·Western blot分析 | 第18-20页 |
| 结果与讨论 | 第20-24页 |
| 1.GST-CUEDC2缺失突变表达载体的鉴定 | 第20页 |
| 2.Flag-CUEDC2缺失突变表达载体的酶切鉴定及表达鉴定 | 第20-22页 |
| ·Flag-CUEDC2缺失突变表达载体的鉴定 | 第20-21页 |
| ·Flaz-CUEDC2缺失突变在293T细胞中表达鉴定 | 第21-22页 |
| 3.IKKα和IKKβ缺失突变表达载体的酶切鉴定及表达鉴定 | 第22-23页 |
| ·IKKα和IKKβ缺失突变表达载体的鉴定 | 第22页 |
| ·IKKα和IKKβ缺失突变表达载体在293T细胞中表达的鉴定 | 第22-23页 |
| ·×Flaz-CUEDC2和3×Flag-PP1表达载体的鉴定 | 第23-24页 |
| 小结 | 第24-25页 |
| 第二部分 CUEDC2与IKKα/β的相互作用及相互作用区域 | 第25-33页 |
| 材料与方法 | 第25-28页 |
| 1 试剂、材料及仪器 | 第25-26页 |
| ·质粒、菌株、细胞株 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·细胞培养试剂 | 第25-26页 |
| ·抗体 | 第26页 |
| ·大型仪器 | 第26页 |
| 2.实验方法 | 第26-28页 |
| ·293T细胞瞬时转染 | 第26页 |
| ·GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第26-27页 |
| ·GST沉淀(pull-down)分析 | 第27-28页 |
| 结果与讨论 | 第28-32页 |
| 1.GST pull-down验证CUEDC2与IKKα/β相互作用 | 第28-29页 |
| 2 GST-CUEDC2融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第29-30页 |
| 3.GST pull-down实验确定CUEDC2与IKKα的相互作用区域 | 第30-31页 |
| 4.CUEDC2与IKKα相互作用示意图 | 第31-32页 |
| 小结 | 第32-33页 |
| 第三部分 CUEDC2抑制TNFα及IL-1激活对NF-κ B通路 | 第33-43页 |
| 材料与方法 | 第33-36页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| ·细胞株、质粒 | 第33-34页 |
| ·试剂及仪器 | 第34页 |
| 2方法 | 第34-36页 |
| ·细胞转染 | 第34页 |
| ·荧光素酶活性测定 | 第34页 |
| ·Western blot分析 | 第34-36页 |
| 结果与讨论 | 第36-42页 |
| 1.CUEDC2过表达抑制TNFα和IL-1β对NF-κ B的转录激活 | 第36-38页 |
| ·293T细胞中CUEDC2过表达抑制TNFα对NF-κ B转录激活 | 第36页 |
| ·Hela细胞中CUEDC2过表达抑制TNFα对NF-κ B转录激活 | 第36-37页 |
| ·过表达CUEDC2抑制IL-1β对NF-κ B的转录激活 | 第37-38页 |
| 2.稳定转染CUEDC2的细胞中TNFα和IL-1β对NF-κ B的转录激活 | 第38-39页 |
| 3.CUEDC2在IKK水平影响NF-κ B转录活性 | 第39-40页 |
| 4.CUEDC2对持续激活型IKKβ刺激的NF-κ B转录活性没有影响 | 第40-42页 |
| 小结 | 第42-43页 |
| 总结 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 附录 | 第48-62页 |
| 英文缩略词 | 第48-50页 |
| 文章交流与发表 | 第50-62页 |
