| 致谢 | 第1-13页 |
| 缩写词 | 第13-17页 |
| 摘要 | 第17-19页 |
| ABSTRACT | 第19-22页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 1 文献综述 | 第24-44页 |
| ·‘BAJH97-01A/B’矮脚黄白菜核雄性不育两用系的研究进展 | 第24-30页 |
| ·来源与特点 | 第24-25页 |
| ·植物学性状观察 | 第25页 |
| ·细胞学研究 | 第25页 |
| ·生理生化指标比较 | 第25-26页 |
| ·基因的表达差异分析 | 第26页 |
| ·雄性不育相关基因的克隆和功能验证 | 第26-30页 |
| ·植物表达载体系统的研究进展 | 第30-39页 |
| ·早期的植物表达载体系统 | 第30-32页 |
| ·两个典型的早期植物表达载体 | 第30-31页 |
| ·早期植物表达载体的改良 | 第31-32页 |
| ·植物表达载体系统的研究现状 | 第32-39页 |
| ·植物RNA干涉技术中的表达载体 | 第32-33页 |
| ·植物病毒表达载体 | 第33-34页 |
| ·Gateway技术和表达载体的模块化构建 | 第34-35页 |
| ·自体荧光蛋白标签中的表达载体 | 第35-36页 |
| ·双分子荧光互补技术中的表达载体 | 第36-37页 |
| ·CRE/loxP重组介导系统中的表达载体 | 第37页 |
| ·应用在特殊研究领域中的双元载体 | 第37-38页 |
| ·面向新的遗传转化对象的双元载体 | 第38页 |
| ·其他类型的植物表达载体 | 第38-39页 |
| ·植物选择标记基因及其去除方法 | 第39-44页 |
| ·植物选择标记基因 | 第39-40页 |
| ·负向选择标记基因 | 第39-40页 |
| ·正向选择标记基因 | 第40页 |
| ·两类选择标记基因的比较 | 第40页 |
| ·植物选择标记基因的去除方法 | 第40-44页 |
| ·依赖于有性杂交的方法 | 第40-41页 |
| ·不依赖于有性杂交的方法 | 第41-42页 |
| ·利用叶绿体遗传工程产生无抗生素标记转基因植物 | 第42-44页 |
| 2 白菜雄性不育相关基因BCMF1的克隆验证与特征分析 | 第44-60页 |
| ·材料与方法 | 第44-48页 |
| ·材料与试剂 | 第44-45页 |
| ·基因组DNA提取 | 第45页 |
| ·总RNA提取 | 第45-46页 |
| ·cDNA的合成 | 第46-47页 |
| ·cDNA和DNA全长序列的扩增 | 第47-48页 |
| ·基因的序列分析 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-56页 |
| ·BcMF1的cDNA和DNA全长序列的验证 | 第48-49页 |
| ·BcMF1核苷酸序列分析 | 第49-51页 |
| ·BcMF1编码蛋白的特征分析 | 第51-54页 |
| ·BcMF1氨基酸同源序列分析 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-60页 |
| ·BcMF1的cDNA全长的差异比较 | 第56-57页 |
| ·BcMF1编码蛋白的功能预测 | 第57-58页 |
| ·BcMF1功能研究有助于了解DUF1216蛋白家族成员的功能 | 第58-60页 |
| 3 白菜雄性不育两用系的BCMF1表达差异分析 | 第60-72页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·材料与试剂 | 第60页 |
| ·表达特征分析 | 第60-61页 |
| ·总RNA提取和电泳 | 第61页 |
| ·转膜 | 第61页 |
| ·探针的标记 | 第61页 |
| ·杂交 | 第61页 |
| ·基因全长序列扩增 | 第61-62页 |
| ·启动子序列扩增 | 第62页 |
| ·TAIL PCR的引物设计 | 第62页 |
| ·TAIL PCR扩增 | 第62页 |
| ·可育株启动子序列的克隆和测序 | 第62页 |
| ·PCR扩增不育株的启动子序列 | 第62页 |
| ·序列比对和特征分析 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-68页 |
| ·BcMF1的表达差异比较 | 第63-64页 |
| ·不育株群BcMF1全长序列获得和比对 | 第64-65页 |
| ·BcMF1启动子序列获得和序列比对 | 第65-67页 |
| ·可育株群BcMF1启动子序列的TAIL PCR扩增 | 第65-66页 |
| ·不育株群BcMF1启动子序列的PCR扩增和比对 | 第66-67页 |
| ·BcMF1启动子序列的特征分析 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-72页 |
| ·BcMF1的表达特征 | 第68-69页 |
| ·BcMF1的表达可能受到上游基因的调控 | 第69页 |
| ·影响BcMF1表达的可能因素 | 第69-72页 |
| 4 BCMF1基因的功能分析 | 第72-100页 |
| ·材料与方法 | 第72-82页 |
| ·材料与试剂 | 第72-73页 |
| ·菜心同源基因的克隆与表达特征分析 | 第73页 |
| ·同源基因的克隆 | 第73页 |
| ·同源基因的表达特征分析 | 第73页 |
| ·表达载体构建及农杆菌转化 | 第73-78页 |
| ·反义表达载体的构建 | 第73-75页 |
| ·RNAi表达载体的构建 | 第75页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第75-78页 |
| ·植物表达载体的遗传转化 | 第78-79页 |
| ·培养基配方 | 第78页 |
| ·播种 | 第78页 |
| ·预培养 | 第78页 |
| ·共培养 | 第78页 |
| ·分化培养 | 第78-79页 |
| ·生根培养 | 第79页 |
| ·移栽 | 第79页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第79-81页 |
| ·转基因植株DNA和总RNA提取 | 第79页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第79页 |
| ·转基因植株的Southern印迹杂交检测 | 第79-80页 |
| ·转基因植株的GUS组织化学染色 | 第80-81页 |
| ·转基因植株的Northern印迹杂交检测 | 第81页 |
| ·转基因植株的形态学和细胞学观察 | 第81-82页 |
| ·转基因植株的形态学观察和育性调查 | 第81页 |
| ·转基因植株花粉生活力观察 | 第81页 |
| ·转基因植株花粉的扫描电镜观察 | 第81-82页 |
| ·转基因植株花粉离体萌发实验 | 第82页 |
| ·转基因植株小孢子发育的细胞学观察 | 第82页 |
| ·结果与分析 | 第82-97页 |
| ·菜心BcMF1同源基因的克隆与表达特征分析 | 第82-83页 |
| ·pBcMF1-AS和pBcMF1-RNAi表达载体的获得 | 第83-84页 |
| ·pBcMF1-AS和pBcMF1-RNAi表达载体转化菜心植株 | 第84-86页 |
| ·pBcMF1-AS和pBcMF1-RNAi转化植株的分子检测 | 第86-90页 |
| ·菜心转化植株的PCR检测 | 第86-87页 |
| ·菜心转化植株的Southern印迹杂交检测 | 第87-88页 |
| ·菜心转化植株的GUS组织化学染色 | 第88-89页 |
| ·菜心转基因植株的Northern印迹杂交检测 | 第89-90页 |
| ·pBcMF1-AS和pBcMF1-RNAi转化植株的形态与细胞学观察 | 第90-97页 |
| ·转化植株的形态学观察和育性调查 | 第90-91页 |
| ·转化植株花粉生活力观察 | 第91-92页 |
| ·转化植株花粉形态的扫描电镜观察 | 第92-94页 |
| ·转化植株花粉离体萌发调查 | 第94-96页 |
| ·菜心转化植株花粉发育的细胞学观察 | 第96-97页 |
| ·讨论 | 第97-100页 |
| ·BcMF1是一个与白菜花粉发育相关的新基因 | 第97-98页 |
| ·BcMF1在菜心植株中的遗传转化 | 第98-100页 |
| 5 芸薹属植物BCMF1同源序列的克隆与进化分析 | 第100-114页 |
| ·材料与方法 | 第100-101页 |
| ·试验材料 | 第100页 |
| ·同源基因的克隆和测序 | 第100-101页 |
| ·同源基因的序列差异分析 | 第101页 |
| ·同源基因的系统进化分析 | 第101页 |
| ·结果与分析 | 第101-111页 |
| ·BcMF1同源序列的扩增和克隆 | 第101-102页 |
| ·BcMF1同源序列特征分析 | 第102-103页 |
| ·BcMF1同源基因的序列比对 | 第103-109页 |
| ·芸薹属植物BcMF1同源基因序列的遗传距离分析 | 第109-110页 |
| ·芸薹属BcMF1同源基因的系统分析 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-114页 |
| ·芸薹属植物BcMF1同源基因的分子克隆 | 第111-112页 |
| ·芸薹属植物BcMF1同源基因的分子进化 | 第112-114页 |
| 6 PBI121表达载体及其转化植株快速鉴定方法研究 | 第114-122页 |
| ·材料与方法 | 第115-117页 |
| ·材料与试剂 | 第115页 |
| ·pBI121表达载体和转化植株的获得 | 第115-116页 |
| ·通用引物设计、PCR扩增和测序 | 第116页 |
| ·PCR扩增产物的酶切分析 | 第116-117页 |
| ·结果与分析 | 第117-120页 |
| ·表达载体鉴定通用引物的PCR扩增 | 第117页 |
| ·表达载体PCR产物的酶切分析 | 第117-118页 |
| ·RNAi表达载体PCR产物的测序验证 | 第118-119页 |
| ·RNAi表达载体转化植株的快速鉴定 | 第119-120页 |
| ·讨论 | 第120-122页 |
| ·快速鉴定的方法也是简单、高效的鉴定方法 | 第120页 |
| ·在pBI121重组质粒插入小片段的鉴定中,PCR的产物酶切鉴定具有显著优势 | 第120-122页 |
| 结论 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-138页 |
| 博士学位攻读期间发表的论文 | 第138页 |
